Obecná analýza sputa. Příprava a studium nativních preparátů sputa

Mikroskopické vyšetření sputum zahrnuje studium nativních (přírodních, nezpracovaných) a obarvených přípravků. Jako první se vyberou hnisavé, krvavé, drobivé hrudky, ty se přenesou na podložní sklíčko v takovém množství, aby po překrytí krycím sklem vznikl řídký průsvitný přípravek. Při malém zvětšení mikroskopu je vidět Kurschmannovy spirály ve formě hustých pramenů hlenu různých velikostí. Skládají se ze středové husté lesklé točené axiální nitě a spirálovitě ji obepínajícího pláště (obr. 9), ve kterém jsou proloženy. Kurschmannovy spirály se objevují v bronchiálním sputu. Při velkém zvětšení v nativním preparátu (obr. 11) lze detekovat leukocyty, alveolární makrofágy, buňky srdečních vad, cylindrické a ploché buňky, buňky maligních nádorů, drúzy aktinomycet, houby, Charcot-Leydenovy krystaly, eozinofily. Leukocyty- šedé zrnité kulaté buňky. Velké množství leukocytů lze nalézt v zánětlivém procesu v dýchacím systému. červené krvinky- malé homogenní nažloutlé disky, které se objevují ve sputu během stagnace v plicním oběhu, plicním infarktu a destrukci tkáně. Alveolární makrofágy- buňky 2-3x větší než leukocyty s bohatou hrubou zrnitostí v . Čistí tak plíce od částic (prach, rozpad buněk), které se do nich dostávají. Zachycující erytrocyty, alveolární makrofágy se mění v buňky srdečních chorob(obr. 12 a 13) se žlutohnědými zrnky hemosiderinu, reagující na pruskou modř. K tomu se do hrudky sputa na podložním sklíčku přidají 1-2 kapky 5% roztoku žluté krevní soli a stejné množství 2% roztoku, promíchá se, přikryje se krycím sklíčkem. Mikroskopické vyšetření po několika minutách. Granule hemosiderinu zmodrají.

Sloupcový epitel dýchací trakt se pozná podle klínovitých nebo pohárkovitých buněk, na jejichž tupém konci jsou v čerstvém sputu patrné řasinky; hodně z toho akutní zánět průdušek a akutní katar horních cest dýchacích. dlaždicového epitelu - velké polygonální buňky z dutiny ústní, nemají žádnou diagnostickou hodnotu. Buňky zhoubných nádorů- velké, různé nepravidelný tvar s velkými jádry (k jejich rozpoznání je nutná velmi velká zkušenost výzkumníka). Elastická vlákna- tenká, kroucená, dvouokruhová bezbarvá vlákna v celém rozsahu stejné tloušťky, na koncích se rozvětvující na dvě části. Často se skládají do prstencových svazků. Seznamte se při rozchodu plicní tkáně. Pro spolehlivější detekci se několik mililitrů sputa vaří se stejným množstvím 10% louhu, dokud se hlen nerozpustí. Po ochlazení se kapalina odstředí přidáním 3-5 kapek 1% alkoholového roztoku eosinu. Sediment se mikroskopicky zkoumá. Elastická vlákna vypadají, jak je popsáno výše, ale mají jasně růžovou barvu (obr. 15). Drúzy aktinomycet pro mikroskopii rozdrcený v kapce glycerinu nebo alkálie. Centrální část drúz tvoří plexus tenkých filament mycelia, je obklopena zářivě umístěnými baňkovitými útvary (obr. 14). Při barvení drcené drúzy podle Grama se mycelium zbarví fialově, šišky jsou růžové. houba Candida albicans má charakter pučících buněk kvasinek nebo krátkého rozvětveného mycelia s malým počtem spor (obr. 10). Charcot-Leiden krystaly- bezbarvé kosočtverečné krystaly různých velikostí (obr. 9), vytvořené z produktů rozpadu eozinofilů, se nacházejí ve sputu spolu s velkým počtem eozinofilů u bronchiálního astmatu, eozinofilních infiltrátů a helmintických invazí do plic. Eosinofily v nativním preparátu se od ostatních leukocytů liší velkou lesklou zrnitostí, lépe rozlišitelné jsou v nátěru barveném sekvenčně 1% roztokem eosinu (2-3 min.) a 0,2% roztokem methylenové modři (0,5 min.) nebo dle Romanovský - Giemsa (obr. 16). S posledním barvením, stejně jako s barvením May-Grunwald, jsou rozpoznány nádorové buňky (obr. 21).

Rýže. 9. Curshmanova spirála (nahoře) a Charcot-Leidenovy krystaly ve sputu (nativní preparát). Rýže. 10. Candida albicans (uprostřed) - pučící kvasinkovité buňky a mycelium se sporami ve sputu (nativní preparát). Rýže. 11. Buňky sputa (nativní preparát): 1 - leukocyty; 2 - erytrocyty; 3 - alveolární makrofágy; 4 - buňky cylindrického epitelu. Rýže. 12. Buňky srdečních vad ve sputu (reakce na pruskou modř). Rýže. 13. Buňky srdečních vad ve sputu (nativní lék). Rýže. 14. Drúza aktinomycet ve sputu (nativní preparát). Rýže. 15. Elastická vlákna ve sputu (eosinová skvrna). Rýže. 16. Eozinofily ve sputu (barva Romanovsky-Giemsa): 1 - eozinofily; 2 - neutrofily. Rýže. 17. Pneumokoky a ve sputu (Gramovo barvení). Rýže. 18. Friedlanderovy diplobacily ve sputu (Gramovo barvení). Rýže. 19. Pfeifferova tyčinka ve sputu (purpurová skvrna). Rýže. 20. Mycobacterium tuberculosis (barvení Ziehl-Nelsen). Rýže. 21. Konglomerát rakovinných buněk ve sputu (barva May-Grunwald).

Při malém zvětšení se Kurshmanovy spirály nacházejí ve formě pramenů hlenu různých velikostí, skládajících se z centrálního axiálního závitu a pláště, který jej spirálovitě obklopuje (tsvetn. obr. 9). Ten je často protkán leukocyty, cylindrickými epiteliálními buňkami, Charcotovými-Leidenovými krystaly. Při otáčení mikrošroubu se axiální závit buď jasně leskne, nebo ztmavne, může být neviditelný a často je vidět pouze jeden. Kurshmanovy spirály se objevují s bronchospasmem, nejčastěji s bronchiálním astmatem, méně často se zápalem plic, rakovinou.

Při velkém zvětšení je zjištěno následující. Leukocyty jsou vždy přítomny ve sputu, je jich mnoho při zánětlivých a hnisavých procesech; mezi nimi jsou eozinofily (s bronchiálním astmatem, astmatickou bronchitidou, helminthickými invazemi do plic), vyznačující se velkou lesklou zrnitostí (tsvetn. Obr. 7). Erytrocyty mohou být jednotlivé v jakémkoli sputu, může jich být hodně s destrukcí plicní tkáně, se zápalem plic a stázou krve v plicním oběhu. Epitel je dlaždicový – velké polygonální buňky s malým jádrem, které vstupují do sputa z hltanu a dutiny ústní, nemají žádnou diagnostickou hodnotu. Cylindrický řasinkový epitel se objevuje ve sputu ve významném množství s lézemi dýchacího traktu. Jednotlivé buňky mohou být v jakémkoli sputu, jsou protáhlé, jeden konec je špičatý, druhý je tupý, nesou řasinky, které se nacházejí pouze v čerstvém sputu; u bronchiálního astmatu se nacházejí zaoblené skupiny těchto buněk obklopené pohyblivými řasinkami, což jim dává podobnost s řasinkami.

Cytologická studie. Studium nativních a barvených přípravků. Ke studiu buněk se pomocí třísek opatrně natahují hrudky sputa na podložní sklíčko. Při vyhledávání nádorových buněk se materiál odebírá v nativním preparátu. Vysušený nátěr se zafixuje methanolem a obarví podle Romanovského - Giemsy (nebo Papanicolaoua). Nádorové buňky se vyznačují homogenní, někdy vakuolizovanou, modrošedou až modrošedou cytoplazmou. modré barvy, velké volné a často hyperchromní fialové jádro s jadérky. Mohou být 2-3 i více jader, někdy jsou nepravidelného tvaru; charakteristický je polymorfismus jader v jedné buňce.

Nejpřesvědčivější jsou komplexy polymorfních buněk popsané povahy (tsvetn. obr. 13 a 14). Eozinofily se barví buď podle Romanovského - Giemsa, nebo postupně 1% roztokem eosinu (2 min.) a 0,2% roztokem methylenové modři (0,5-1 min.).

SPUTUM (sputum) - secernováno během vykašlávání v nadbytku a (nebo) patologicky změněným tracheobronchiálním tajemstvím; v nosní části hltanu a dutiny ústní se s ní obvykle mísí sliny a tajemství sliznice nosu a vedlejších nosních dutin.

Normálně se tracheobronchiální tajemství skládá z hlenu vylučovaného serózními a mukózními žlázami a pohárkovými buňkami sliznice průdušnice a velkých průdušek a buněčnými elementy, zejména alveolárními makrofágy a lymfocyty. Existuje názor na dvouvrstvou strukturu tracheobronchiálního hlenu: tekutější vrstva (sol) obklopuje řasinky řasinkového epitelu a silnější – povrchová – vrstva (gel) je v kontaktu s konci řasinek. Hustá gelovitá část hlenu má fibrilární strukturu, viditelnou mikroskopicky. Tajemství sliznice pokrývající nosní průchody a vedlejší nosní dutiny má mnoho společného s tracheobronchiálním tajemstvím, ale s nezávislým patolem se proces v horních cestách dýchacích (např. rýma) obvykle výrazně liší od tracheobronchiálního tajemství, které v M. analýza může mít významný diagnostický význam.

Normálně má tracheobronchiální hlen, stejně jako sliny a nosní hlen, baktericidní vlastnosti. Mechanismem mukociliárního čištění spojeného s činností řasinkového epitelu zajišťuje odstranění vdechnutých částic, metabolických produktů a buněčného detritu. Objem tracheobronchiální sekrece se běžně pohybuje od 10 do 100 ml za den; zdravý člověk většinou spolkne celé toto množství.

M. se objevuje v důsledku patol, zvýšení množství bronchiálního sekretu (např. při infekčním nebo alergickém zánětu sliznice průdušek, působení dráždivých faktorů vdechovaného vzduchu) a porušení mechanismu jeho odstranění. V zánětlivá onemocnění průdušek, mění se reologické vlastnosti tracheobronchiální sekrece, což v kombinaci se zvýšením množství produkovaného hlenu a oslabením funkce řasinkového epitelu vede ke zpomalení pohybu hlenu podél bronchiálního stromu, stagnuje a nakazí se. Rozlišení mezi normálním a patolovým, tracheobronchiálním tajemstvím však představuje velké potíže kvůli rozmanitosti metod pro získání tajemství od zdravých jedinců a velké variabilitě normálních fyzikálních a chemických látek. parametry tracheobronchiální sekrece; proto je rozlišení mezi „normou“ a „patologií“ podmíněné.

Povaha, složení a vlastnosti sputa

M. množství při nek-ry patol, procesy (bronchiální astma, obstrukční bronchitida) může být špatné (2-3 plivance); ale například v přítomnosti bronchiektázie může jeho množství dosáhnout několika set mililitrů.

Barva M. je dána jeho složením. Může být bezbarvý nebo mít nažloutlý odstín, zvláště když je smíchán s hnisem; nazelenalá barva svědčí o hnisavé stagnaci M. a vysvětluje se přítomností enzymu verdoperoxidázy obsaženého v neutrofilních leukocytech a uvolňovaného při jejich rozpadu (změna barvy M. je spojena s přeměnou železité porfyrinové skupiny enzymu) . M. může být jasně žlutá, t. zv. kanárská barva; to je způsobeno přítomností velkého počtu eozinofilů v něm, což je pozorováno u eozinofilního infiltrátu v plicích (viz Lefflerův syndrom). Rezavá barva M. se často vyskytuje u krupózní pneumonie v důsledku výskytu hematinu, který se uvolňuje při rozpadu erytrocytů, které pronikly do lumen alveolů během diapedézy (viz). Černá barva M. závisí na nečistotě částic uhlí v ní (s pneumokoniózou); nek-ry léky (např. antibiotikum rifampicin) barví M. načervenalou barvou.

Obvykle M. nevoní. Hnilobný zápach získává s abscesem a gangrénou plic v důsledku přidání hnilobné infekce.

Podle konzistence se rozlišuje tekutý, hustý a viskózní hlen.Reologické vlastnosti hlenu závisí na elasticitě a viskozitě hlenu. Podle Dulfana a Adlera (M. J. Dulfano, K. V. Adler, 1975) je rychlost pohybu hlenu v průduškách přímo úměrná elasticitě a nepřímo úměrná viskozitě M.

Rozlišujte podle charakteru: 1) M. hlen - bezbarvá, obvykle viskózní konzistence; je zvláště viskózní (sklovitý) po záchvatu bronchiálního astmatu; 2) mukopurulentní M., který se tvoří při mnoha onemocněních průdušek a plic; v obstrukční bronchitida, infekčně-alergická forma bronchiálního astmatu. Tlustý M. může odcházet při kašli v podobě odlitků průdušek; zvláště tlustý a viskózní hlenohnisavý M. vyniká u cystické fibrózy (viz); 3) hnisavá M. (je vzácná bez příměsi hlenu); pozorováno např. při proražení pleurálního empyému do lumen bronchu; 4) krvavý M., obsahující pruhy nebo krevní sraženiny nebo mající pěnivý charakter a šarlatovou barvu, ke kterému dochází při plicní krvácení(cm.).

Struktura M., stejně jako struktura normálního tracheobronchiálního sekretu, zahrnuje proteiny, především glykoproteiny, sacharidy, nukleotidy a lipidy. Většina biochemických složek difunduje z plazmy, ale některé jsou syntetizovány v plicní tkáni a průduškách, zejména surfaktant (viz), sekreční IgA (viz Imunoglobuliny) a mucin (viz). Muciny s vysokým obsahem sialického to-t se nacházejí v části tracheobronchiálního hlenu, který má fibrilární strukturu a do značné míry určují jeho elastické vlastnosti. Fosfolipidy, které jsou součástí povrchově aktivní látky, se také nacházejí v tracheobronchiálním sekretu. Surfaktant tvoří komplexy mucin-surfaktant s kyselými muciny, které jsou součástí struktury tracheobronchiálního hlenu. Podle Litta (M. Litt, 1974) a Jenssena (A. O. Jenssen, 1974) jsou glykoproteiny s dlouhými sacharidovými řetězci schopny tvořit agregáty (s hron, bronchitidou, bronchiálním astmatem), což zvyšuje viskozitu M. Voda je 89- 95 % hlenu a je většinou ve strukturním komplexu s glykoproteiny. Tracheobronchiální hlen obsahuje elektrolyty - sodík, chlorid, ionty vápníku.

Imunol, vlastnosti tracheobronchiálního sekretu a také M., jsou definovány takovými látkami, jako je laktotransferin vylučovaný buňkami mukózních žláz bronchiálních trubic (baktericidní účinek laktotransferinu se vysvětluje jeho schopností vázat železo nezbytné pro reprodukci mikroorganismů) lysozym (viz), interferon (viz).

Tracheobronchiální hlen obsahuje sekreční IgA, jeho maximální množství je obsaženo v sekretu průdušnice a velkých průdušek. Strukturní rysy sekrečního IgA jsou způsobeny přítomností tzv. alfa řetězce sekreční (S) složky. Tato složka je syntetizována epiteliálními sekrečními buňkami sliznice průdušnice a průdušek a je integrována do molekuly IgA produkované plazmatickými buňkami. Sekreční složka chrání sekreční IgA před destruktivním působením lysozomálních enzymů při transportu buněčnou membránou a v tracheobronchiálním sekretu jej chrání před proteolytickým působením enzymů obsažených v M.

Důležitou vlastností sekrečního IgA je schopnost při interakci s mucinem zůstávat na povrchu řasinek epitelu dýchacího traktu a vytvářet jakoby obal sekrečních molekul IgA. Hlavní ochranný účinek sekrečního IgA se projevuje schopností aglutinovat bakterie, bránit jejich adhezi na membránu epiteliálních buněk a inhibovat růst a reprodukci bakterií. Sekreční IgA je také důležitý při ochraně těla před viry.

Podle Kaltreidera (H. Kaltreider, 1976) nepřítomnost sekrečního IgA při jeho vrozeném selektivním deficitu přispívá k výskytu alergických onemocnění, což potvrzuje nárůst počtu lidí s deficitem IgA mezi pacienty alergických onemocnění ve srovnání s celou populací. Vrozený nedostatek IgA - genetická vada vyjádřené absencí plazmatických buněk, které tvoří IgA s normálním obsahem jiných imunoglobulinů. Klinicky se tato vada nemusí nijak projevit, bývá však pozorován sklon k sinusitidě, bronchitidě, enteropatii.

V distálních úsecích bronchiálního stromu se snižuje množství sekrečního IgA a zvyšuje se množství IgG, jehož aktivita v tracheobronchiálním sekretu se projevuje aglutinací a opsonizací bakterií, neutralizací bakteriálních toxinů a virů, aktivací komplementu. systému, lýze určitých bakterií za přítomnosti komplement. Jeho opsonizační funkce je zvláště důležitá (viz Opsoniny), protože interakce IgG s bakteriemi usnadňuje fagocytózu (viz).

U M. jsou trvale detekovány inhibitory proteázy: alfa1-antitrypsin ve volné formě a v kombinaci s elastázou a kolagenázou z leukocytů, alfa2-makroglobulin, antichymotrypsin a další dva nízkomolekulární inhibitory se širokou antiproteázovou aktivitou. Důležitý je komplex inhibitorů tracheobronchiální sekrece obranný mechanismus z působení proteolytických enzymů bakteriálního, leukocytárního a makrofágového původu, uvolňovaných při infekčním zánětu.

Hnisavý M. obsahuje významné množství kolagenázy, elastázy a enzymů podobných chymotrypsinu, to-žito přispívá k rozkladu bílkovinných makromolekul, zlepšuje reologické vlastnosti M. a jeho izolaci; tyto enzymy však mohou působit škodlivě na bronchiální sliznici, parenchym a elastické struktury plic. Škodlivý účinek může být také způsoben lysozomálními enzymy leukocytů; o jejich přítomnosti svědčí vysoká aktivita enzymu kyselé fosfatázy – markeru lysozomů (viz). Izoenzymy kyselé fosfatázy M. se vyznačují nízkou elektroforetickou pohyblivostí, což ukazuje na hluboké poškození lysozomálních membrán.

Provádí se odběr sputa pro výzkum různé metody. sbírat M. lépe ráno kdy je nejbohatší na mikroflóru. Před vykašláváním je nutné vypláchnout ústa slabým roztokem antiseptika, poté převařenou vodou, aby v M.. bylo méně slin. Nejspolehlivější výsledky studia mikroflóry při příjmu tajemství z průdušek přes bronchoskop (viz Bronchoskopie); to je však často obtížné v případech viskózní konzistence nebo malého množství M. Proto se většinou provádí výplach průdušek izotonickým roztokem chloridu sodného, ​​který však snižuje hodnotu mikrobiolu, výzkum (tajné ředění, tzv. vliv izotonického roztoku chloridu sodného na mikroorganismy) . Pro tsitol je použití fibrobronchoskopu podle výzkumů cenné, to-ry dává šanci na příjem M. ze segmentálních průdušek.

Vyšetření sputa

Aplikujte makroskopické, mikroskopické (včetně tsitol.), bakteriální, někdy biologické a fyzikální a chemické na studium přijatých M. výzkum.

Makroskopické vyšetření

Slavit denní množství, charakter (sliznatý, hnisavý, krvavý aj.), barva a vůně M., jeho konzistence, jakož i rozvrstvení M. při stání ve skleněné misce: hlenovitá a hlenovitá M. neodlupuje, hnisavá - je dělená na serózní a hnisavé vrstvy, s hnisavými procesy v plicích se M. dělí na tři vrstvy (horní je mukopurulentně pěnivá, střední je serózní, spodní obsahuje hnis a produkty tkáňového rozpadu).

V vzácné případy M. může obsahovat broncholitidy (viz Broncholitiáza), cizí tělesa viditelná pouhým okem, dále částečky potravy nebo kontrastní hmotu (pokud pacient podstoupil vyšetření jícnu), což je známka bronchoezofageální píštěle. Při výzkumu pod lupou nativních drog M. je možné najít Kurshmannovy spirály - bělavá, průhledná, vývrtkovitá vlákna, ve středu to-rykh je stočená briliantová nit; jejich přítomnost ukazuje na spastický stav průdušek.

Mikroskopické vyšetření zahrnuje studium nativních a obarvených preparátů. Pro přípravu nativního přípravku se M. nalije v tenké vrstvě do Petriho misky a vyberou se jednotlivé elementy (například hnisavé nebo hlenové bulky, krevní pruhy apod.), které se přenesou na podložní sklíčko a zakryjí s krycím sklíčkem.

Mikroskopické vyšetření obarvených nátěrů tracheobronchiálního sekretu zdravých jedinců ve výtěrech z bronchů získaných při bronchoskopii odhalí mizivé množství buněčných elementů a alveolárních makrofágů (počet alveolárních makrofágů je u kuřáků výrazně zvýšený). Alveolární makrofágy obsahující hemosiderin (tzv. buňky srdečních vad) mají v cytoplazmě zlatožluté inkluze; spolehlivě jsou určeny reakcí na pruskou modř (tsvetn. obr. 3); tyto buňky se nacházejí v kongesci v plicích (viz. Srdeční selhání), plicním infarktu (viz Plíce), idiopatické hemosideróze plic (viz), v kombinaci s odpovídajícím klínem, obrázek, detekce takových buněk u M. má diagnostickou hodnotu.

Značný počet eozinofilních granulocytů, krystaly Charcot-Leiden ve formě lesklých hladkých bezbarvých kosočtverců různých velikostí, vznikajících rozpadem eozinofilních granulocytů, v kombinaci s Kurschmannovými spirálami dávají triádu charakteristickou pro bronchiální astma (tsvetn. Obr. 1 ).

Tzv. rýžovitá tělíska neboli Kochovy čočky jsou zelenožluté, dosti husté útvary sražené konzistence velikosti od špendlíkové hlavičky po malý hrášek, charakteristické pro destruktivní formy tuberkulózy, s moderní metody léčba tuberkulózy je u M.

Diagnostický význam má průkaz drúz aktinomycet, zahalených hnisavou hmotou (viz. Aktinomykóza), ale i háčků a puchýřů echinokoka, uvolněných při čerstvé ruptuře echinokoka. plicní cysty(viz Echinokokóza).

V barvených i nebarvených preparátech se kvasinky Candida mohou nacházet ve formě pučících buněk a filament pseudomycelia (viz Kandidóza), což však není dostatečným podkladem pro diagnostiku plicní kandidózy.

Charakteristické prvky lze nalézt u M. při nek-ry profesionálních chorobách. Například identifikace azbestová tělíska - zlatožluté protáhlé útvary s oteklými konci, skládající se z azbestového vlákna potaženého bílkovinnou látkou - potvrzuje diagnózu plicní azbestózy (viz Silikoza).

Detekce velkého množství elastických vláken ve formě tenkých nití, které silně lámou světlo (tisk. Obr. 2) svědčí o destrukci plicní tkáně jakékoli etiologie. Velmi vzácné tzv. korálová vlákna (Coppen-Jonesova vlákna) - hrubá, nabobtnalá, s baňkovitým ztluštěním na koncích, což je důsledek usazování na elastických vláknech mastný to-t a promývá se dlouhodobým destruktivním procesem (například v přítomnosti tuberkulózních kaveren). Otevření zkamenělého tuberkulózního ložiska v lumen bronchu může být doprovázeno současnou detekcí v M. zvápenatělých elastických vláken, krystalů cholesterolu, Mycobacterium tuberculosis a amorfního vápna (tzv. Ehrlichova tetráda).

Cytologické vyšetření

Bakterioskopicky v Gramově obarvených nátěrech (tsvetn. obr. 6) lze detekovat streptokoky ve formě řetězce, stafylokoky (často kombinované ve formě hroznů), diplobakterie Friedlander (Klebsiella pneumoniae), pneumokoky (Streptococcus pneumoniae). Bakterioskopické vyšetření M. k identifikaci příčiny nespecifických onemocnění průdušek a plic má zpravidla přibližnou hodnotu.

Nejdůležitější podmínkou pro cílenou léčbu nespecifických zánětlivých onemocnění průdušek a plic je identifikace původce, pro který se kultivuje sputum a výtěry z průdušek. K tomu se M. vysévá na vhodná živná média (viz): krevní agar, cukrový bujón, Shkolnikovovo médium atd. Vypěstované mikroby se identifikují (viz Identifikace mikrobů) a jejich citlivost na antibakteriální léky.

Stanovení citlivosti každého typu bakterií přidělených z M. se provádí plodinami 18hodinové kultivace bakterií v bujónu na krevním agaru, na osetý povrch to-rogo umístěte papírové disky napuštěné antibakteriálními látkami. Petriho misky s výsevem udržujte 1V2 - 2 hodiny při pokojové teplotě, poté v termostatu při t ° 37 ° po dobu 18-24 hodin. Citlivost kmene se posuzuje podle velikosti zóny inhibice růstu bakterií kolem disků. Se zónou inhibice růstu do 10 mm je mikrob považován za necitlivého, se zónou větší než 10 mm - citlivý na toto antibakteriální činidlo. Odolnost mikroorganismů vůči léky vlivem různých faktorů (viz Léková rezistence mikroorganismů).

Hlavními podmínkami pro účinnost bakteriálního, výzkumu jsou získání patolu, materiálu před antibakteriální úprava, jeho výzkum v nejbližších hodinách, stejně jako správný výběr technických metod zpracování patolu, materiálu nezbytného pro tento případ (viz. Bakteriologické metody). Je žádoucí dynamicky studovat mikroflóru v souvislosti s možností změny patogena (viz Klinická mikrobiologie). Nejspolehlivějšími výsledky microbiol, M. výzkumu je detekce ve dvou až třech po sobě jdoucích výzkumech velkého počtu stejných patogenních nebo podmíněně patogenních mikroorganismů.

biologický výzkum

Biologický výzkum spočívá v infikování pokusných zvířat (častěji morčata) a používá se především jako nejcitlivější metoda pro detekci Mycobacterium tuberculosis. M. se ošetří kyselinou sírovou ke zničení nespecifické mikroflóry, promyje se izotonickým roztokem chloridu sodného, ​​odstředí. Sediment v izotonickém roztoku chloridu sodného se podává zvířeti subkutánně do inguinální oblasti nebo intraperitoneálně. Při přítomnosti mycobacterium tuberculosis u M. po 1-1,5 měsíci. zvíře může vyvinout lymfadenitidu nebo zemřít kvůli generalizaci procesu. Použití biolu, metoda je omezena z důvodu nutnosti dlouhodobého sledování zvířat (při absenci známek rozvíjející se tuberkulózy sledování pokračuje 3 měsíce).

Fyzikální a chemický výzkum

Ke studiu fyzikálních vlastností M. - viskozita a elasticita - využívají metodu proudění kapilárami s tlakem jódu; spolehlivější výsledky získá studie pomocí rotačního viskozimetru. Reakce M. je zpravidla mírně zásaditá, při rozkladu M., při míšení žaludečního obsahu se stává kyselou. Zkoumání hodnoty pH se provádí na pH metru (získány hodnoty od 5,0 do 9,0); hodnota pH je do značné míry dána povahou a intenzitou zánětu průdušek.

Bibliografie: Problémy pneumologie, ed. N. V. Putová, v. 6, str. 48, L., 1977; Směrnice pro klinický laboratorní výzkum, ed. E.A. Kost a L. T. Smirnova, str. 309, M., 1964; Průvodce pneumologií, ed. N. V. Putova a G. B. Fedoseeva, str. 110, L., 1978; Příručka ftiziatra, ed. N. A. Shmelev a V. L. Einis, str. 83 a další, M., 1975; F e d o c e e in G. B. aj. K otázce závažnosti imunopatologické složky a jejího průkazu u pacientů s infekčně-alergickým bronchiálním astmatem, Ter. arch., vol. 47, č. 3, s. 99, 1975; Clarke C. W. Aspects of sérové ​​a sputové protilátky u chronické obstrukce dýchacích cest, Thorax, v. 31, str. 702, 1976; DulfanoM. J. a, A d 1 e r K. B. Fyzikální vlastnosti sputa, Amer. Rev. resp. Dis., v. 112, str. 341, 1975; K a 1 t-r ei der H. B. Exprese imunitních mechanismů v plicích, tamtéž, v. 113, str. 347, 1976; MasalaC., Amendolea M.A. A. B o n i n i S. Hlenové protilátky u plicní tuberkulózy a chronické obstrukční plicní nemoci, Lancet, v. 2, str. 821, 1976; Roussel P. a. Ó. Biochemická definice lidského tracheobronchiálního hlenu, Lung, v. 154, str. 241, 1978, bibliogr.; Van As A. Mechanismy uvolnění dýchacích cest, Amer. Rev. resp. Dis., v. 115, str. 721, 1977; Wanner A. Klinické aspekty mukociliárního transportu, tamtéž, v. 116, str. 73, 1977, bibliogr.

S. S. Žicharev.

Mikroskopické vyšetření nativních a fixovaných barvených preparátů sputa umožňuje podrobně studovat jeho buněčné složení a do určité míry odrážející povahu patologického procesu v plicích a průduškách, jeho aktivitu, identifikovat různé vláknité a krystalické útvary, které mají také velkou diagnostickou hodnotu a konečně k předběžnému posouzení stavu mikrobiální flóry dýchacího traktu (bakterioskopie).

Pod mikroskopem se používají nativní a barvené preparáty sputa. Pro studium mikrobiální flóry (bakterioskopie) se nátěry ze sputa obvykle barví podle Romanovského-Giemsy podle Grama a pro detekci Mycobacterium tuberculosis, ale Ziehl-Nielsen.

Buněčné prvky a elastická vlákna

Z buněčných elementů, které lze nalézt ve sputu pacientů s pneumonií, mají diagnostickou hodnotu epiteliální buňky, alveolární makrofágy, leukocyty a erytrocyty.

epitelové buňky. Skvamózní epitel z dutiny ústní, nosohltanu, hlasivek a epiglottis není diagnostický, i když detekce velkého množství buněk dlaždicového epitelu obvykle ukazuje na nekvalitní vzorek sputa dodaný do laboratoře a obsahující významnou příměs slin.

U pacientů s pneumonií je sputum považováno za vhodné k vyšetření, pokud pod mikroskopem s malým zvětšením počet epiteliálních buněk nepřesahuje 10 na zorné pole. Větší počet epiteliálních buněk ukazuje na nepřijatelnou převahu obsahu orofaryngu v biologickém vzorku.

Alveolární makrofágy, které lze také v malém množství nalézt v jakémkoli sputu, jsou velké buňky retikulohistiocytárního původu s excentricky umístěným velkým jádrem a hojnými inkluzemi v cytoplazmě. Tyto inkluze mohou sestávat z nejmenších prachových částic (prachových buněk), leukocytů atd. absorbovaných makrofágy. Počet alveolárních makrofágů se zvyšuje s zánětlivé procesy v plicního parenchymu a dýchacích cest, včetně zápalu plic.

Buňky cylindrického řasinkového epitelu vystýlají sliznici hrtanu, průdušnice a průdušek. Vypadají jako podlouhlé buňky, rozšířené na jednom konci, kde se nachází jádro a řasinky. Buňky cylindrického řasinkového epitelu se nacházejí v jakémkoli sputu, ale jejich nárůst naznačuje poškození bronchiální a tracheální sliznice (akutní a chronická bronchitida, bronchiektázie, tracheitida, laryngitida).

Leukocyty v malém množství (2-5 v zorném poli) se nacházejí v jakémkoli sputu. Při zánětech plicní tkáně nebo sliznice průdušek a průdušnice, zejména při hnisavých procesech (gangréna, plicní absces, bronchiektázie), se jejich počet výrazně zvyšuje.

Při barvení preparátů sputa podle Romanovského-Giemsy je možné odlišit jednotlivé leukocyty, což má někdy důležitou diagnostickou hodnotu. Ano, v těžký zánět plicní tkáně nebo bronchiální sliznice zvyšuje jak celkový počet neutrofilních leukocytů, tak počet jejich degenerativních forem s jadernou fragmentací a destrukcí cytoplazmy.

Zvýšení počtu degenerativních forem leukocytů je nejdůležitějším znakem aktivity zánětlivého procesu a závažnějšího průběhu onemocnění.

červené krvinky. Jednotlivé erytrocyty lze nalézt téměř v každém sputu. Významné zvýšení je pozorováno při porušení vaskulární permeability u pacientů s pneumonií, při destrukci plicní nebo bronchiální tkáně, stagnaci v plicním oběhu, plicním infarktu atd. Ve velkém počtu erytrocytů ve sputu se nachází hemoptýza jakéhokoli původu.

Elastická vlákna. Je třeba také zmínit další prvek sputa - plastová vlákna, která se objevují ve sputu při destrukci plicní tkáně (absces plic, tuberkulóza, hniloba rakovina plic atd.). Elastická vlákna jsou ve sputu přítomna ve formě tenkých dvouokruhových, zvlněných nití s ​​dichotomickým dělením na koncích. Vzhled elastických vláken ve sputu u pacientů s těžkou pneumonií naznačuje výskyt jedné z komplikací onemocnění - tvorby abscesu plicní tkáně. V některých případech při formování plicní absces elastická vlákna ve sputu mohou být detekována ještě o něco dříve než odpovídající radiografické změny.

Často s krupózní pneumonií, tuberkulózou, aktinomykózou, fibrinózní bronchitidou lze v přípravcích sputa nalézt tenká fibrinová vlákna.

Známky aktivního zánětlivého procesu v plicích jsou:

1. povaha sputa (mukopurulentní nebo purulentní);
2. zvýšení počtu neutrofilů ve sputu, včetně jejich degenerativních forem;
3. zvýšení počtu alveolárních makrofágů (z jednotlivých shluků několika buněk v zorném poli a více);

Vzhled elastických vláken ve sputu naznačuje destrukci plicní tkáně a tvorbu plicního abscesu.

Konečné závěry o přítomnosti a stupni aktivity zánětu a destrukce plicní tkáně se vytvoří až při jejich srovnání klinický obraz onemocnění a výsledky jiných laboratorních a instrumentální metody výzkum.

mikrobiální flóry

Mikroskopie nátěrů ze sputa, barvení podle Grama a studium mikrobiální flóry (bakterioskopie) u některých pacientů s pneumonií umožňuje přibližně stanovit nejpravděpodobnějšího původce plicní infekce. Tato jednoduchá metoda expresní diagnostiky patogena není dostatečně přesná a měla by být používána pouze v kombinaci s jinými (mikrobiologickými, imunologickými) metodami vyšetření sputa. Ponorná mikroskopie obarvených nátěrů sputa je někdy velmi užitečná pro nouzový výběr a předepisování adekvátní antibiotické terapie. Je pravda, že je třeba mít na paměti možnost kontaminace obsahu průdušek mikroflórou horních cest dýchacích a ústní dutiny, zejména pokud není sputum správně sbíráno.

Proto je sputum považováno za vhodné pro další vyšetření (bakterioskopii a mikrobiologické vyšetření), pouze pokud splňuje následující podmínky:

• Gramovo barvení ve sputu odhalí velké množství neutrofilů (více než 25 v zorném poli při malém zvětšení mikroskopu);
• počet epiteliálních buněk charakteristických pro obsah orofaryngu nepřesahuje 10;
• v preparátu převažují mikroorganismy stejného morfologického typu.

Gramovým barvením v nátěru ze sputa lze někdy docela dobře identifikovat grampozitivní pneumokoky, streptokoky, stafylokoky a skupinu gramnegativních bakterií - Klebsiella, Pfeifferův bacil, E. coli atd. Zároveň se grampozitivní bakterie obracejí modrá a gramnegativní - červená.

Bakteriální původci pneumonie

Předběžná mikroskopie sputa je nejvíce jednoduchým způsobem ověření původce pneumonie a má určitý význam pro volbu optimální antibiotické terapie. Například, pokud Gramově obarvené nátěry ukazují místo antibiotik pozitivní diplokoky (pneumokoky) nebo stafylokoky široký rozsah působení, které zvyšuje riziko selekce a šíření mikroorganismů rezistentních na antibiotika, je možné předepsat cílenou terapii, která je aktivní proti pneumokokům nebo stafylokokům. V jiných případech může detekce gramnegativní flóry převažující v nátěrech naznačovat, že původcem pneumonie je gramnegativní enterobakterie (Klebsiella, coli atd.), což vyžaduje určení vhodné cílené terapie.

Je pravda, že přibližný závěr o pravděpodobném původci plicní infekce během mikroskopie lze učinit pouze na základě významného nárůstu bakterií ve sputu v koncentraci 10 6 - 10 7 mc / ml a více (L. L. Vishnyakova) . Nízká koncentrace mikroorganismů (např.

Je třeba také pamatovat na to, že „atypické“ intracelulární patogeny (mykoplazma, legionella, chlamydie, rickettsie) se podle Grama nebarví. V těchto případech může být podezření na "atypickou" infekci, pokud nátěry ze sputa vykazují disociaci mezi vysokým počtem neutrofilů a extrémně nízkým počtem mikrobiálních buněk.

Bohužel, metoda bakterioskopie a obecně se vyznačuje spíše nízkou senzitivitou a specificitou. Prediktivní hodnota i u dobře vizualizovaných pneumokoků dosahuje sotva 50 %. To znamená, že v polovině případů dává metoda falešně pozitivní výsledky. Je to způsobeno více důvody, jedním z nich je, že asi 1/3 pacientů již před hospitalizací dostala antibiotika, což výrazně snižuje účinnost mikroskopie sputa. Navíc i v případě pozitivní výsledky studií naznačujících dostatečně vysokou koncentraci „typických“ bakteriálních patogenů (např. pneumokoků) v nátěru, nelze zcela vyloučit přítomnost koinfekce „atypickými“ intracelulárními patogeny (mykoplazmata, chlamydie, legionely).

Mikroskopie stěru ze sputa barveného podle Grama v některých případech pomáhá ověřit původce pneumonie, i když obecně má velmi nízkou prediktivní hodnotu. "Atypické" intracelulární patogeny (mykoplazmata, legionella, chlamydie, rickettsie) nejsou obecně bakterioskopicky ověřeny, protože se nebarví podle Grama.

Je třeba zmínit možnost mikroskopické diagnostiky u pacientů s pneumonií plísňového onemocnění plic. Nejrelevantnější pro pacienty dlouhodobě léčené širokospektrými antibiotiky je mikroskopická detekce nativních nebo barvených preparátů sputa Candida albicans ve formě buněk podobných kvasinkám a rozvětveného mycelia. Naznačují změnu mikroflóry tracheobronchiálního obsahu, ke které dochází pod vlivem antibiotické léčby, která vyžaduje výraznou korekci terapie.

V některých případech je u pacientů s pneumonií nutné odlišit existující plicní lézi od tuberkulózy. K tomuto účelu se používá barvení sputa stěrem podle Ziehla-Nielsena, které v některých případech umožňuje identifikovat Mycobacterium tuberculosis, i když negativní výsledek takové studie neznamená, že pacient nemá tuberkulózu. Při barvení sputa podle Ziehl-Neelsena se mycobacterium tuberculosis zbarví červeně a všechny ostatní prvky sputa jsou modré. Tuberkulózní mykobakteria mají podobu rozbředlých, rovných nebo mírně zakřivených tyčinek různých délek s oddělenými zahuštěními. Jsou umístěny v přípravku ve skupinách nebo jednotlivě. Detekce i jednotlivých mykobakterií tuberkulózy v přípravku má diagnostickou hodnotu.

Ke zlepšení účinnosti mikroskopické detekce mycobacterium tuberculosis se používá řada doplňkových metod. Nejběžnější z nich je tzv. flotační metoda, kdy se homogenizované sputum protřepává s toluenem, xylenem nebo benzínem, jehož kapky při plavání zachycují mykobakterie. Po usazení sputa se vrchní vrstva nanese pipetou na podložní sklíčko. Poté se preparát zafixuje a obarví podle Ziehl-Neelsena. Existují další metody akumulace (elektroforéza) a mikroskopie bakterií tuberkulózy (fluorescenční mikroskopie).

Buňky

• Alveolární makrofágy jsou buňky retikulohistiocytárního původu. Velké množství makrofágů ve sputu je detekováno v chronických procesech a ve stádiu řešení akutních procesů v bronchopulmonálním systému. Alveolární makrofágy obsahující hemosiderin („buňky srdečních vad“) jsou detekovány při plicním infarktu, krvácení, stagnaci v plicním oběhu. Makrofágy s lipidovými kapkami jsou známkou obstrukčního procesu v průduškách a bronchiolech.
• Xantomové buňky (tukové makrofágy) se nacházejí v abscesu, aktinomykóze, echinokokóze plic.
• Buňky cylindrického řasinkového epitelu - buňky sliznice hrtanu, průdušnice a průdušek; vyskytují se u bronchitidy, tracheitidy, bronchiálního astmatu, zhoubné novotvary plíce.
• Dlaždicový epitel se nachází při vstupu slin do sputa, nemá žádnou diagnostickou hodnotu.
• Leukocyty v tom či onom množství jsou přítomny v jakémkoli sputu. Velké množství neutrofilů je detekováno v mukopurulentním a purulentním sputu. Sputum je bohaté na eozinofily u bronchiálního astmatu, eozinofilní pneumonie, helmintických lézí plic, plicního infarktu. Eozinofily se mohou objevit ve sputu u tuberkulózy a rakoviny plic. Lymfocyty se ve velkém množství vyskytují u černého kašle a méně často u tuberkulózy.
• Erytrocyty. Detekce jednotlivých erytrocytů ve sputu nemá žádnou diagnostickou hodnotu. V přítomnosti čerstvé krve ve sputu se stanovují nezměněné erytrocyty, pokud však krev, která byla delší dobu v dýchacím traktu, ze sputa odchází, jsou detekovány vyplavené erytrocyty.
• Buňky maligních nádorů se nacházejí v maligních novotvarech.

vlákna

• Elastická vlákna se objevují během rozpadu plicní tkáně, což je doprovázeno destrukcí epiteliální vrstvy a uvolněním elastických vláken; nacházejí se u tuberkulózy, abscesu, echinokokózy, novotvarů v plicích.
• Korálová vlákna se nacházejí u chronických plicních onemocnění, jako je kavernózní tuberkulóza.
• Kalcifikovaná elastická vlákna - elastická vlákna impregnovaná vápenatými solemi. Jejich detekce ve sputu je charakteristická pro rozpad tuberkulózního petrifikátu.

Spirály, krystaly

• Kurshmanovy spirály se tvoří ve spastickém stavu průdušek a přítomnosti hlenu v nich. Během kašlacího šoku je viskózní hlen vytlačen do lumen většího bronchu a spirálovitě se točí. Kurshmanovy spirály se objevují u bronchiálního astmatu, bronchitidy, plicních nádorů, které stlačují průdušky.
• Charcot-Leidenovy krystaly jsou produkty rozpadu eozinofilů. Obvykle se objevují ve sputu obsahujícím eozinofily; charakteristické pro bronchiální astma, alergické stavy, eozinofilní infiltráty v plicích, plicní motolice.
• Krystaly cholesterolu se objevují s abscesem, echinokokózou plic, novotvary v plicích.
• Krystaly hematoidinu jsou charakteristické pro plicní absces a gangrénu.
• Drúzy aktinomycet jsou detekovány při aktinomykóze plic.
• Echinokokové elementy se objevují u plicní echinokokózy.
• Dietrichovy zátky - hrudky žlutavě šedé barvy, mající zápach. Skládají se z detritu, bakterií, mastných kyselin, kapiček tuku. Jsou charakteristické pro plicní absces a bronchiektázie.
• Ehrlichova tetráda se skládá ze čtyř prvků: kalcifikovaný detritus, kalcifikovaná elastická vlákna, krystaly cholesterolu a mycobacterium tuberculosis. Objevuje se při rozpadu kalcifikovaného primárního ložiska tuberkulózy.

Mycelium a pučící houbové buňky se objevují s houbovými lézemi bronchopulmonálního systému.

Pneumocysty se objevují s pneumocystovou pneumonií.

Při kokcidioidomykóze plic jsou detekovány houbové sféruly.

Larvy Ascaris jsou detekovány ascariázou.

Larvy střevního akné jsou detekovány se strongyloidózou.

Vajíčka motolice plicní se nacházejí u paragonimiázy.

Prvky nalezené ve sputu u bronchiálního astmatu. Při bronchiálním astmatu se obvykle oddělí malé množství hlenu, viskózního sputa. Makroskopicky lze vidět Kurshmanovy spirály. Mikroskopické vyšetření je charakterizováno přítomností eozinofilů, cylindrického epitelu, jsou nalezeny Charcot-Leydenovy krystaly.

2) Žlučové pigmenty. Objevují se ve sputu při průchodu z krve nebo pokud existuje komunikace mezi játry a plícemi, například když jaterní absces praskne do plic. Obsah žlučových pigmentů ve sputu s plicními chorobami je často.

Pro stanovení žlučových pigmentů se malé množství sputa smíchá s dvojnásobným množstvím (objemově) alkoholu, dobře se protřepe a zfiltruje.

Připraví se směs: voda - 625,0; alkohol 95°-125,0; chlorid sodný - 75,0; jodid draselný - 12,0; 10% jodová tinktura - 3,5 a vzniklé činidlo se navrství na filtrát.

V přítomnosti velkého množství žluči se na hranici obou kapalin objeví zelený prstenec; pokud je žluči málo, má prsten namodralou barvu.

III. MIKROSKOPICKÉ VYŠETŘENÍ Sputa

Technika přípravy nativního preparátu:

Tampon se připravuje přímo z nádoby!

Sputum je distribuováno do průsvitné vrstvy

Vybírají se částice, které se liší barvou, konzistencí a tvarem - hlenovité, hnisavé, krvavé atd.

Vybraný materiál se přenese na podložní sklíčko s aplikátorem nebo bakteriologickou kličkou, překryté krycím sklíčkem.

Preparát je prohlížen při malém zvětšení pro počáteční orientaci a poté při velkém zvětšení pro rozlišení tvarovaných prvků.

Vyvarujte se opakovaného odběru materiálu a odtrhávání kličky nebo aplikátoru z nátěru - při těchto manipulacích vzniká aerosol!

Studium nativní drogy

1) Epitel a další buněčné prvky:

A) Dlaždicový epitel je deskvamovaný epitel sliznice dutiny ústní, nosohltanu, epiglottis a hlasivky, mající vzhled plochých tenkých buněk s malým pyknotickým jádrem a homogenní cytoplazmou. Nachází se v jakémkoli vzorku sputa. Nemá žádnou speciální diagnostickou hodnotu.

B) Cylindrický nebo hranolovitý řasinkový epitel může mít různý tvar, převážně klínovitý, méně často zaoblený, trojúhelníkový, nepravidelný; zaoblené nebo oválné jádro je umístěno převážně excentricky, blíže k bazální části buňky, s přítomností kutikuly a řasinek v široké (apikální) části buňky, jasně definovaná homogenní cytoplazma. Jednotlivé buňky se nacházejí v jakémkoli sputu a ve velkém počtu - s lézemi dýchacího traktu (bronchitida, bronchiální astma).

C) Pohárkové buňky vylučují slizniční sekreci. Spolu s buňkami cylindrického řasinkového epitelu se provádí mukociliární clearance. V malých průduškách a bronchiolech pohárkové buňky normálně chybí.

D) Bazální a intermediární buňky jsou umístěny hluboko v epiteliální vrstvě a nedosahují na volný povrch průdušek. Jedná se o nejméně diferencované buněčné formy, díky nimž dochází k fyziologické regeneraci.

E) Neutrofilní granulocyty při velkém zvětšení vypadají jako zaoblené, někdy nepravidelně tvarované buňky o průměru 10-12 mikronů s granulární cytoplazmou a jádrem sestávajícím z několika segmentů. Objevují se ve sputu při různých zánětlivých procesech v dýchacím systému; především jsou pozorovány u hnisavého zánětu, při kterém často podléhají tukové degeneraci a rozpadu, proto se na některých místech preparátu nachází zrnitý bezstrukturní útvar.

E) Eosinofilní granulocyty se nacházejí ve sputu ve formě jednotlivých buněk, ale i skupin a shluků. Buňky jsou zaoblené a vyplněné granulemi stejné velikosti a tvaru. V nativním preparátu jsou eozinofilní leukocyty snadno odlišitelné od jiných buněk díky této jednotné velké lesklé granularitě. Pro přesnější rozpoznání eozinofilů se preparát barví podle Pappenheima stejně jako krevní nátěry, ale na kratší dobu (8–10 minut). Ve velkém množství jsou eozinofily pozorovány ve sputu u alergických stavů (bronchiální astma, eozinofilní bronchitida) a helmintiáz (plicní echinokokóza).

G) Erytrocyty se nacházejí ve sputu převážně nezměněné při destrukci plicní tkáně, při zápalu plic, plicním infarktu atd. Jednotlivé erytrocyty se nacházejí v jakémkoli sputu. Příznakem plicního krvácení je pouze přítomnost velkého počtu z nich.

H) Alveolární makrofágy – velké buňky kulatý tvar velikost od 10 do 25 mikronů (2-3krát více než leukocyty) retikuloendoteliálního původu. U barvených preparátů je jejich cytoplazma pěnová, bledě modré barvy, s výraznými obrysy.

Charakteristickým znakem alveolárních makrofágů je přítomnost různých inkluzí v jejich cytoplazmě - fagocytovaný uhelný prach, tabákový pigment, bezbarvá myelinová zrna, tukové kapky atd.

Alveolární makrofágy obsahující hemosiderin nebo erytrocyty se nazývají "buňky srdeční malformace" nebo siderofágy. "Buňky srdečních vad" se vyskytují, když červené krvinky vstoupí do dutiny alveolů. To lze pozorovat při stagnaci v plicním oběhu, zejména mitrální stenóze, stejně jako při plicním infarktu, krvácení, pneumonii. Pro spolehlivější stanovení výše uvedených buněk se provádí tzv. reakce na pruskou modř: z preparátu, ve kterém byly nalezeny alveolární fagocyty se zlatožlutou zrnitostí, se sejme krycí sklíčko a suší se na vzduchu. Na přípravek se nakapou 1–2 kapky 5% roztoku žluté krevní soli a po 2–3 minutách 1–2 kapky 3% roztoku kyseliny chlorovodíkové, promíchají se, přikryjí krycím sklíčkem a studují se pod vys. zvětšení. V přítomnosti hematosiderinu zrna zmodrají.

Alveolární makrofágy s fagocytovanými prachovými částicemi se nazývají „prachové buňky“.

Prachové buňky obsahují částice prachu, sazí, uhlí, grafitu atd. fagocytované částice někdy zcela vyplní buňku a zbarví ji načernalou nebo nahnědlou. Při jejich významném obsahu jsou všechny sputa zbarveny stejnou barvou. Popsané buňky se nejčastěji nacházejí ve slizničním sputu lidí, kteří z povahy své profese musí vdechovat ten či onen prach. Při akutních zánětlivých procesech mizí ze sputa a znovu se objevují ve fázi řešení procesu.

Buňky s tukovou degenerací nebo lipofágy mají jinou velikost, zaoblený tvar a jejich cytoplazma je vyplněna kapkami tuku. Hromadění takových buněk charakterizuje pneumonii v počáteční fáze kdy je sputum ještě hlenovitého charakteru s příměsí krve. Alveolární makrofágy se v malém počtu nacházejí v každém sputu, ale u chronických zánětlivých onemocnění jsou početnější. Funkce alveolárních makrofágů je různorodá: účastní se reakcí buněčné a humorální imunity, vylučují lysozomální enzymy, prostaglandiny, interferon, cyklické nukleotidy, některé složky komplementu a řadu dalších látek, které mohou ovlivnit reprodukci a aktivaci lymfocytů, fibroblasty a další buněčné elementy.

I) Buňky maligních nádorů se často dostávají do sputa, zvláště pokud nádor roste endobronchiálně a rozpadá se. V nativním preparátu se tyto buňky vyznačují svým atypismem: velká velikost, různě ošklivý tvar, velké jádro. Při chronických zánětlivých procesech v průduškách však epitel vystýlající je metaplaziem získává atypické rysy, které se od nádorových buněk jen málo liší. Nádorové buňky lze tedy identifikovat pouze při detekci komplexů atypických a navíc polymorfních buněk, zejména pokud jsou umístěny na vazivovém podkladu nebo spolu s elastickými vlákny. Sputum z maligních novotvarů obsahuje tukové kuličky, alveolární makrofágy, krystaly cholesterolu a někdy elastická vlákna.

K) Obří buňky - Langgansovy buňky - charakteristické pro tuberkulózu, oválné nebo kulaté až do průměru 60 mikronů, obsahující 5-12 jader, obvykle umístěných podél periferie buňky. Ve sputu se nacházejí ve vzácných případech. Lze je odlišit pouze u barvených přípravků.

L) Formace myelinu v buňkách. Buňky obsahující myelinové útvary, jako jsou makrofágy, jsou velké kulaté nebo oválné buňky obsahující zcela bezbarvé matné kapičky různých velikostí a tvarů. Někdy tyto kapky vyplní celou buňku. Poměrně často se vyskytují i ​​volně ležící myelinové kapky. Při stlačení krycího sklíčka se myelinové útvary vytlačují z buněk a mění svůj tvar. Jejich kontury jsou velmi jemné, mnohem jemnější než kontury tukových kapek. Nejsou obarvené Sudan III. Buňky obsahující myelin, stejně jako volné myelinové útvary, jsou buď v čistém slizničním sputu, nebo ve slizničních částech hnisavě-slizovitého sputa. Vyskytují se nejčastěji ve sputu vylučovaném ráno u pacientů s chronickými lézemi hltanu a hrtanu. Jejich původ není jasný. Zdá se, že nemají diagnostickou hodnotu.

2) Vláknité útvary a elastická vlákna.

A) Elastická vlákna jsou prvky pojivové tkáně a objevují se ve sputu při destrukci (rozpadu) plicní tkáně: nejčastěji u tuberkulózy, dále u rakoviny, abscesu, gangrény a echinokokózy.

Elastická vlákna mají vzhled tenkých, lesklých dvouokruhových zakřivených vláken celé stejné tloušťky, dichotomicky se rozvětvující, někdy si zachovávající alveolární uspořádání. Protože se nenacházejí v každé kapce sputa, uchýlí se k usnadnění hledání k metodě jejich koncentrace a barvení, po které si elastická vlákna zachovají výše popsaný charakter a vyniknou jasně červenou barvou.

B) Korálová vlákna (Colpen-Jonesova vlákna) jsou elastická vlákna potažená mýdly. Jsou matná, silnější než elastická vlákna, vyskytují se ve formě samostatných úlomků a různých shluků. Detekce takových vláken ve sputu ukazuje na přítomnost tuberkulózních kaveren.

C) Kalcifikovaná elastická vlákna - hrubá, nasycená vápenatými solemi, tyčinkovité útvary. Jejich fragmenty připomínají vzhled tečkované čáry, sestávající z šedavých, světlo lámajících tyčinek.

Nacházejí se ve sputu při rozpadu tuberkulózního ohniska.

D) Fibrin je retikulární uspořádání paralelních tenkých vláken. Významné množství fibrinu ve sputu je často pozorováno u zánětlivých procesů (fibrinózní bronchitida, tuberkulóza, aktinomykóza, lobární pneumonie).

E) Kurshmanovy spirály jsou častěji detekovány mikroskopickým vyšetřením, ale někdy jsou viditelné pouhým okem. Hledejte je ve slizničních částech sputa. Vynikají v podobě bělavých, vývrtkovitých, zkroucených trubicovitých tělísek, ostře ohraničených od zbytku hmoty sputa. Mikroskopicky se skládají ze spirálovitě stočených tenkých vláken (plášť), v jejichž středu je poměrně silná stočená, lesklá středová nit. Ten je na mnoha místech zkroucený a tvoří smyčky, v důsledku čehož ještě ostřeji vynikne. Někdy se to neděje ve spirále. Existují také holá centrální vlákna bez pláště. Plášť tvoří leukocyty, cylindrické epiteliální buňky a Charcot-Leydenovy krystaly. Existují také ne zcela typické spirály, sestávající ze slizových vláken, částečně spirálovitě stočených, částečně protáhlých buněk s dlouhými spirálovitě stočenými výběžky. Vzhled spirál ve velkém množství má určitou diagnostickou hodnotu u bronchiálního astmatu, u kterého se obvykle nacházejí velké spirály. Jednotlivé malé spirálky se vyskytují u řady dalších onemocnění - zápal plic, plicní tuberkulóza atd.

3) Krystalové útvary

A) Charcot-Leydenovy krystaly jsou bezbarvé osmistěny různých velikostí, připomínající střelku kompasu. Vznikají z proteinových produktů při rozpadu eozinofilů, takže je nelze vždy detekovat v čerstvě izolovaném sputu, navzdory přítomnosti eozinofilů. Přítomnost těchto krystalů je charakteristická pro bronchiální astma, eozinofilní bronchitidu, plicní léze s helminty (pulmonální motolice).

B) Krystaly hematoidinu se nacházejí v hemoragiích v nekrotické tkáni (rozpad hemoglobinu v prostředí bez kyslíku). Jedná se o kosočtverečné nebo jehličkovité krystaly žlutohnědé barvy. Ve sputu jsou nejčastěji pozorovány s abscesem, méně často s gangrénou plic.

C) Krystaly cholesterolu vypadají jako bezbarvé obdélníkové tablety s ulomeným rohem. Vzniká v důsledku odbourávání tuku v uzavřených dutinách (absces, tuberkulóza, echinokokóza a novotvary plic).

D) Krystaly mastných kyselin - se stagnací sputa v dutinách (tuberkulóza, plicní absces, bronchiektázie).

E) Krystaly leucinu a tyrosinu lze nalézt ve sputu za stejných podmínek jako krystaly cholesterolu, ale mnohem méně často.

E) Jiné krystalické útvary – šťavelan vápenatý, fosforečnan sodnoamonný (trojitý fosforečnan), uhličitan vápenatý a fosforečnan vápenatý, které se někdy nacházejí ve sputu, nemají žádnou diagnostickou hodnotu.

4) Kombinované formace

A) Dietrich plugs jsou detritus s bakteriemi, nahromadění jehličkovitých krystalů mastných kyselin a kapiček neutrálního tuku. Nacházejí se ve sputu s abscesem, gangrénou plic a bronchiektáziemi. Jedná se o bělavé nebo žlutošedé hrudky sražené konzistence velikosti špendlíkové hlavičky, někdy s páchnoucí zápach tvarem podobný čočce. Velmi podobné jsou jim zátky na mandlích, které jsou pozorovány u chronických zánětlivých stavů mandlí a mohou se uvolnit při kašli a při absenci sputa.

B) Ehrlichova tetráda se skládá z kalcifikovaných elastických vláken, kalcifikovaného sýrovitého detritu, krystalů cholesterolu a Mycobacterium tuberculosis. Je důležitý v diagnostice plicní tuberkulózy.

A) Drúzy aktinomycet (radiant houba, Actinomyces) makroskopicky představují shluky ve formě malých, hustých, nažloutlých zrn. Při velkém zvětšení je uprostřed drúz hustá akumulace radiálně uspořádaných zrnitých vláken houby, která na periferii končí ztluštěním ve formě baňkovitých útvarů. Když se rozdrcené drúzy obarví Gramem, mycelium zfialoví a šišky zrůžoví.

Pro mikroskopické vyšetření sputa se připravují především nebarvené (nativní) preparáty sputa. Užitečnost studie závisí na správné preparaci a počtu naskenovaných preparátů. Materiál pro výzkum se odebírá z různých míst a přenese se kovovou jehlou na podložní sklíčko, poté se přikryje krycím sklíčkem tak, aby sputum nevyčnívalo za jeho okraje.
Přípravky by měly být tenké, prvky v nich by měly být umístěny v jedné vrstvě. Mikroskopie se provádí nejprve při malém zvětšení mikroskopu (čočka 8X, okulár 10X), prohlížení při malém zvětšení dává představu o kvalitě zvoleného materiálu, umožňuje detekovat akumulaci buněk, krystalické útvary, najít elastická vlákna, Kurshmanovy spirály, novotvarové prvky. Další vyšetření se provádí při velkém zvětšení mikroskopu (objektiv 40X, okulár 10X).
Současně lze ve sputu nalézt více či méně leukocytů a mezi nimi tmavší barvou a přítomností hojné, čiré, světlo lámající zrnitosti v cytoplazmě rozlišují eozinofily, jejichž přítomnost je charakteristická pro bronchiální astma a další alergické stavy. Erytrocyty ve sputu vypadají jako nažloutlé disky. Jednotlivé erytrocyty se nacházejí v každém typu sputa, přičemž velký počet z nich je charakteristický pro krvavé sputum a vyskytuje se při plicním infarktu, plicním krvácení, stagnaci v plicním oběhu.

Ve sputu lze vždy nalézt epitel . Dlaždicový epitel vstupuje do sputa z dutiny ústní a nosohltanu. Velké množství buněk svědčí o nedostatečně dobré ústní hygieně před odběrem sputa k vyšetření.
Detekce ve sputu cylindrického řasinkového epitelu vystýlajícího sliznici hrtanu, průdušnice a průdušek ukazuje na poškození příslušných oddělení. Buňky mají protáhlý tvar, prodloužení na jednom konci, kde se nachází zaoblené jádro, a řasinkové řasinky. Tyto buňky jsou umístěny ve skupinách a v čerstvě izolovaném sputu lze pozorovat aktivní pohyb řasinek. Při zánětlivých procesech (bronchitida, pneumonie, profesionální plicní nemoci) se ve sputu nacházejí alveolární makrofágy, buňky histiocytárního systému. Jedná se o velké zaoblené buňky s inkluzemi v cytoplazmě. Pokud alveolární makrofágy obsahují hemosiderin, pak se nazývají siderofágy nebo obrazně „buňky srdečních vad“, protože se mohou objevit při stagnaci krve v plicích s dekompenzovanými srdečními vadami. S jistotou lze tyto buňky identifikovat reakcí tvorby pruské modři.

Bakterioskopie.

Tato fáze vyšetření sputa zahrnuje mikroskopii sklíček barvených Ziehl-Neelsenem k detekci Mycobacterium tuberculosis a sklíček barvených Gramem ke studiu mikroflóry sputa. Někdy se pro detekci Mycobacterium tuberculosis uchýlí k obohacení flotační metodou. Preparáty sputa pro bakterioskopické vyšetření připravené na podložním sklíčku se suší, fixují nad plamenem hořáku a poté barví.

Barvení Ziehl-Neelsen.

Činidla:
Karbolfuchsin: 1 g zásaditého fuchsinu se rozpustí v 10 ml ethylalkoholu, roztok se vlije do 100 ml 5% roztoku kyseliny karbolové.
3% chlorovodíkový alkohol: 3 ml HCl a 97 ml ethylalkoholu
Vodný 0,5% roztok methylenové modři

Průběh barvení:

Na přípravek se položí kousek filtračního papíru a nalije se roztok karbolického fuchsinu, poté se přípravek zahřívá nad plamenem hořáku, dokud se neobjeví páry, ochladí se a znovu zahřeje (3x). Po vychladnutí drogy se filtrační papír vyhodí a k odbarvení se ponoří do solného lihu. Odbarvujte, dokud není barva zcela odstraněna, opláchněte vodou a doplňte methylenovou modří po dobu 20-30s. Znovu opláchněte vodou a osušte na vzduchu. Mikroskopicky s imerzním systémem.
Tuberkulózní mykobakteria jsou zbarvena červeně, všechny ostatní prvky sputa a bakterie jsou modré. Tuberkulózní mykobakteria mají vzhled tenkých, mírně zakřivených tyčinek různé délky se zesílením na koncích nebo uprostřed, uspořádaných ve skupinách a jednotlivě.
Saprofyty odolné vůči kyselinám jsou také obarveny červeně, pokud jsou barveny podle Ziehl-Neelsena. Diferenciální diagnostika tuberkulózní mykobakterie a acidorezistentní saprofyty jsou prováděny bakteriologickými výzkumnými metodami

Výzkum by se měl vyvarovat:
příprava hustých nátěrů sputa;
fixace špatně vysušených nátěrů;
nedostatečná fixace;
zuhelnatění drogy při delší fixaci.

Pokud je mykobakterií málo, tak in pravidelné stěry nenajdou se a uchýlí se k metodě akumulace.

Flotační metoda (plovoucí) podle Pottengera.

Průběh výzkumu:

Čerstvě izolované sputum (ne více než 10----15 ml) se umístí do láhve s úzkým hrdlem, přidá se dvojnásobné množství 0,5% roztoku louhu a směs se intenzivně protřepává po dobu 10-15 minut. Poté přidejte 1 ml xylenu (můžete benzín, toluen) a asi 30 ml destilované vody na zředění sputa a znovu protřepejte 10-15 minut. Doplňte destilovanou vodou v takovém množství, aby hladina kapaliny stoupala k hrdlu láhve. Nechte 1-2 hodiny usadit. Vzniklá svrchní bělavá vrstva se po kapkách odstraní pipetou a nanese se na podložní sklíčka předehřátá na 60 °C (sklenice na zahřátí lze položit na kovový tác a zakrýt vodní lázní). Každá následující kapka se aplikuje na předchozí vysušenou. Preparát je fixován a obarven podle Ziehl-Neelsena.
Nejspolehlivější výsledky při průkazu Mycobacterium tuberculosis dávají bakteriologické výzkumné metody. Jiné bakterie nacházející se ve sputu, jako jsou streptokoky, stafylokoky, diplobacily, Friedlanderovy bacily atd., lze rozpoznat pouze kultivací. Bakterioskopické vyšetření léku má v těchto případech pouze přibližnou hodnotu. Sklíčka jsou obarvena methylenovou modří, purpurovou nebo Gramovou barvou.

Gramova skvrna.

Činidla:
Karbolový roztok genciánové violeti: 1 g genciánové violeti se rozpustí v 10 ml 96% lihu, roztok se vlije do 100 ml 1-2% kyseliny karbolové, protřepe
Lugolův roztok: 1 g jódu, 2 g jodidu draselného a 300 ml destilované vody; jód a jodid draselný se rozpustí nejprve v 5-8 ml vody a poté: zbytek vody se nalije
96% alkohol nebo raw
10% roztok karbolového fuchsinu: 10 ml karbolického fuchsinu a 90 ml destilované vody

Průběh výzkumu:

Na fixovaný přípravek se položí proužek filtračního papíru a zalije se roztokem genciánové violeti. Barva 11/2-2 min. Papír se vyhodí a přípravek se na 2 minuty zalije Lugolovým roztokem a poté se přípravek opláchne v lihu do šedavého zbarvení. Promyté vodou a obarvené 10% roztokem karbolického fuchsinu po dobu 10-15 s. Poté se preparát znovu promyje vodou, suší a mikroskopuje imerzním objektivem.

Vyšetření sputa.

U zdravého člověka se může v tracheobronchiálním stromě vytvořit až 50-100 ml sekretu denně. Vylučuje se bez kašle díky přátelské práci řasinkového epitelu a je ochrannou reakcí těla proti škodlivé účinky vdechováním různých plynů, prachových částic, mikroorganismů. V patologii mohou pacienti během kašle produkovat sputum obsahující produkty rozpadu tkání, životně důležitou aktivitu mikroorganismů, krevních buněk a další. Tato studie má důležitou diagnostickou hodnotu pro stanovení etiologie respiračního onemocnění, povahy patologického procesu a stanovení účinku léčby.

Pro vyšetření se sputum odebírá zpravidla ráno,

před jídlem do čisté průhledné skleněné misky s pevně přišroubovaným víčkem nebo zabroušenou zátkou po vypláchnutí úst převařenou vodou. Vnikání slin do sputa se nedoporučuje. Při malém množství sputa, např. u tuberkulózy, se sputum odebírá během 1-2 dnů.Vyšetření sputa by mělo být provedeno co nejdříve (čerstvé) kvůli destrukci buněčných elementů. Provádí se makroskopické, mikroskopické a bakteriologické vyšetření sputa.

Makroskopické vyšetření sputum zahrnuje stanovení množství, vůně, barvy, charakteru, konzistence, vrstvení, patologických nečistot.

Množství vylučovaného sputa za den se může pohybovat od několika mililitrů do 1,5 litru („plné v ústech“) a závisí na povaze patologických změn, stavu pacientů a věku. U dětí, těžce nemocných pacientů a starších osob může být narušen kašlací reflex a může se snížit množství vylučovaného sputa. Malé množství sputa, až 50-70 ml, je obvykle pozorováno u pacientů s pneumokokovou pneumonií, akutní a chronickou bronchitidou a bronchiálním astmatem. Výběr významná částka sputum, více než 200 ml a dokonce 1-1,5 litru je pozorováno s velkým abscesem ve fázi vyprazdňování, velkou bronchiektázií, gangrénou plic, kavernózní tuberkulózou.

Vůně vlhka. Slizniční sputum zpravidla nemá žádný zápach. Při rozpadu plicní tkáně a proteinů sputa (gangréna, absces ve stadiu vyprazdňování, bronchiektázie) má vylučované sputum obvykle nepříjemný hnilobný zápach.

Současně pacienti, aby se snížila sekrece takového sputa, zaujímají polohu na bolavé straně. Lékař by měl požádat pacienta, aby si lehl na zdravou stranu, aby se zlepšila drenážní funkce a úplnější výtok sputa.

Podle charakter sputum je hlenové (s bronchitidou), serózní (s alveolárním plicním edémem), mukopurulentní

(pneumonie, bronchiektázie, plicní tuberkulóza), purulentní (plicní absces, bronchiektázie) a hnilobné (plicní gangréna). Krvavou povahu sputa lze pozorovat při plicním krvácení, hojné hemoptýze

(tuberkulóza, plicní absces).

Podle konzistence sputum je tekuté (s bronchitidou, alveolárním plicním edémem), polotekuté (s plicním abscesem), drobivé (gangréna plic) a viskózní (bronchiální astma).

Rozdělení do vrstev. S rozvojem patologického procesu v bronchopulmonálním aparátu lze výsledný sputum, umístěný v průhledné skleněné nádobě, po odstátí rozdělit do tří vrstev. Jednovrstvé sputum bez zápachu se vyskytuje u pacientů s bronchitidou; 2vrstvá, ve které je horní vrstva serózní a spodní je hnisavá, zelenožlutá se vyskytuje u pacientů s plicním abscesem; 3-vrstvé sputum: horní - slizniční, střední - serózní, spodní - hnisavé, skládající se z rozkládající se plicní tkáně se vyskytuje s gangrénou plic.

Barva sputa závisí na složení, povaze sputa a přítomnosti nečistot v něm. Bezbarvý (slizniční) sputum je charakteristický pro bronchitidu, žlutozelený - s hnisavými onemocněními plic; šarlatová s krvácením; hnědá, hnědá "rezavá" barva - s pneumokokovou pneumonií v důsledku výskytu červených krvinek v alveolech; růžový, "pěnový" - s alveolárním plicním edémem. Pokud se nečistoty, jako je uhelný prach, dostanou do sputa, může zčernat.

patologické nečistoty. U řady onemocnění lze pouhým okem zjistit Kurshmanovy spirály (bronchiální astma) ve sputu - průhledné, bílé klikaté prameny, čočka - husté, malé, žlutozelené útvary, včetně krystalů cholesterolu, elastická vlákna (plicní tuberkulóza ), Dietrichovy zátky, podobné čočce, ale neobsahující Mycobacterium tuberculosis a při rozdrcení vydávají nepříjemný zápach (absces a gangréna plic), drúzy aktinomycet - zpravidla malá zrna, žlutá barva, podobně jako krupice, fibrinové sraženiny, oblasti rozkládající se plicní tkáně.

Mikroskopické vyšetření sputa. Studie se provádí jak nebarvené (nativní), tak Gramově barvené nebo Ziehl-Nielsenovo sputum. K přípravě nativního preparátu se odebere nejvíce změněná část sputa (hnisavé, krvavé nebo slizovité hrudky) a rovnoměrně se umístí na podložní sklíčko. Poté se materiál překryje krycím sklíčkem a zkoumá se nejprve pod malým a poté velkým zvětšením.

Ve sputu můžete najít:

1. Buněčné prvky:

- epiteliální buňky z dutiny ústní;

- leukocyty a jejich degenerativní formy u zánětlivých onemocnění, zejména hnisavých;

- erytrocyty s hemoptýzou;

- alveolární makrofágy obsahující v cytoplazmě

osobní částice: prach, leukocyty, hemoroidy

derin (v tomto případě se nazývají siderofágy -

„buňky srdečních vad“ a vyskytují se při stagnaci v

malý kruh krevního oběhu);

- eozinofily - při bronchiálním astmatu, eozinofilní

zápal plic;

- atypické buňky - s rozkládající se rakovinou průdušek nebo plic.

2. Vlákna:

- Kurshmanovy spirály u bronchiálního astmatu, což jsou provazce hlenu různé velikosti, skládající se z tenkého a hustého axiálního vlákna, zahaleného do spirály.

se svinutými vlákny a obsahujícími leukocyty, eozinofily, Charcot-Leidenovy krystaly (viz níže). Vyskytuje se při bronchiálním astmatu;

– Krystaly Charcot-Leiden jsou bezbarvé, bílkovinné

povaha produktů rozpadu eozinofilů, které mají tvar oktaedrů. Vyskytuje se především v průduškách

astma. Je třeba poznamenat, že přítomnost eozinofilů, Kurshmanových spirál a Charcot-Leydenových krystalů (Er-

čárkovaný) je charakteristický pro bronchiální astma;

- elastická vlákna, která vypadají jako tenká lesklá

zkroucené nitě vzniklé ve sputu při rozpadu plicní tkáně (gangréna, plicní absces, tuberkulóza, rozkládající se rakovina plic).

3. Krystaly:

- Charcot-Leiden (viz výše); hematoidiny, které jsou produktem rozkladu hemoglobinu různých forem, vznikajícího při nekróze plicní tkáně a plicním krvácení;

- cholesterol, vznikající při odbourávání tuku (absces, plicní tuberkulóza);

- krystaly mastných kyselin v abscesu a gangréně plic.

Bakteriologické vyšetření sputa. Tato studie se provádí pomocí imerzní mikroskopie obarveného materiálu sputa. Nejprve se nátěr obarví podle Grama, což umožňuje identifikovat grampozitivní modrou (pneumokoky, stafylokoky, streptokoky) a gramnegativní, červenou (E. coli, amébóza, Pfeifferův bacil a další) flóru ve sputu. V tomto případě lze vypočítat přibližný počet patogenů. Poté, při barvení podle Ziehla-Neelsena, je možné detekovat Mycobacterium tuberculosis, které se nacházejí v nátěrech ve formě „hromady“ nebo jednotlivě.Pro jemnější studium infekčního plicního onemocnění a stanovení účinnosti léčby pacientů se kultury ze sputa používají na živných půdách. Při růstu mikroorganismů se do těchto médií umístí buď disky s antibiotiky a účinnost léčiva je určena zónami inhibice růstu, nebo se připraví suspenze s kulturou mikroorganismů s antibiotiky a minimální inhibiční koncentrací léčiva. je určeno.

Vyšetření pleurální tekutiny. Za normálních okolností je v pleurální dutině malé množství tekutiny (50-100 ml) nutné pro klouzání pohrudnice. Při patologii se může zvýšit množství tekutiny. V tomto případě se používá pleurální punkce, a to jak s diagnostickou, tak i terapeutický účel.

Technika pleurální punkce- pacient obvykle sedí na židli, čelem k zad v uvolněném stavu. Dříve se pacientovi podá ultrazvuk pleurální dutiny nebo rentgen hrudníku, aby se určil bod pro punkci. Obvykle se jedná o 7-8 mezižeberní prostor podél střední klavikulární nebo zadní axilární linie. Oblast vpichu je ošetřena alkoholový roztok jód, pak se provede lokální znecitlivění 0,5% roztokem lnovokainu nebo lidokainu. Punkce se provádí podél horního okraje spodního žebra, protože neurovaskulární svazek probíhá podél spodního okraje. Dlouhá punkční jehla s nasazenou pryžovou hadičkou se zavede kolmo k hrudníku a po vstupu do pleurální dutiny se z hadičky odstraní svorka a pleurální tekutina se evakuuje speciálním přístrojem nebo injekční stříkačkou v závislosti na množství. . Extrahovaná tekutina je odeslána k vyšetření a jehlou může být injikováno léčivo pro terapeutické účely. Poté se jehla odstraní, místo vpichu se ošetří jódem a aplikuje se sterilní obvaz. Poté se provede druhá kontrola rentgenem, aby se vyhodnotilo nejen množství zbývající tekutiny, ale také aby se identifikovala možná plicní patologie, která nebyla kvůli tekutině viditelná. Je třeba si uvědomit, že krev v jehle může znamenat poškození cévy nebo plicní tkáně.

Kontraindikace pro punkci:

1. Výrazné porušení hemostázy.

2. Portální hypertenze.

3. Mimořádně vážný stav pacienta.

Tekutina získaná pleurální punkcí může být zánětlivé nebo nezánětlivé povahy. Pro jeho analýzu se provádí stanovení fyzikálně-chemických, mikroskopických a bakteriologických vlastností.

Bakteriologické vyšetření pleurální tekutiny Provádí se za účelem stanovení původce onemocnění a stanovení jeho citlivosti na antibakteriální léky. K tomu se sediment po odstředění pleurální tekutiny používá k naočkování na živná média a přípravě nátěrů. Po obarvení podle Grama nebo ZielNielsena se provede studie. Důležitou diagnostickou hodnotou je stanovení Mycobacterium tuberculosis, které se provádí flotační metodou.

Při aktinomykóze plic v nativních preparátech sputa se kromě drúz aktinomycet obvykle nacházejí velké xantomové buňky, někdy ve velkém počtu. Proto je v přítomnosti těchto buněk nutné pátrat po drúzách aktinomycet.

B) Kvasinkové houby rodu Candida - pučící buňky a krátká pučící vlákna pseudomycelia (buňky jsou kulatého nebo oválného tvaru, pseudomycelium je kloubové, rozvětvené, v přeslenech jsou na něm umístěny spory).Vyskytují se při dlouhodobé léčbě antibiotiky a ve velmi oslabení pacienti.

E) Ascaris. Jsou známy případy výtoku se sputem ascaris. U vážně nemocných škrkavky někdy vlezou do dýchacích cest. Také popsáno ojedinělé případy nález larev škrkavek ve sputu.

G) Přítomnost prvoků ve sputu nemá zvláštní význam. Zřejmě se usazují v dutinách vzniklých při gangrénách, bronchiektáziích a tuberkulóze. Ve vzácných případech se prvoci dostávají do těchto dutin ze střev přes játra; vyskytují se améby, zástupci bičíkovců (Trichomonas) a ojediněle i Balantidium coli.

6) Azbestová tělesa

Při azbestóze plic (vláknitý zánět způsobený dlouhodobým vdechováním azbestového prachu) se někdy vyskytují zlatožlutá tělíska o délce 20 až 100 mikronů velmi zvláštního tvaru, sestávající jakoby z kotoučů a tyčí navlečených na osa. Někdy je vidět i středová osa – tzv. krystal. Existují také shluky malých částic, vyznačující se ostrým lomem světla. Tělesa představují změny v azbestových vláknech v organickém prostředí.

Sputum s azbestózou je hlenovité nebo hnisavé, obsahuje obří polynukleární fagocyty. K nalezení těl se podrobí následujícímu ošetření: do sputa se přidá stejný objem 10% roztoku NaOH nebo Na2CO3 zahřátého na 80 °, směs se nechá stát, dokud se hlen úplně nerozpustí, po který se odstředí 10-15 minut, kapalina se vypustí ze sedimentu, sediment se protřepe s malým množstvím vody, podruhé odstředí a prozkoumá nejprve slabým suchým systémem, poté k podrobnému vyšetření - silný suchý nebo ponorný systém. Obvykle je v přípravku velmi málo těl -1-2.

Studium barvených přípravků

Mikroskopie obarvených preparátů má za cíl studovat mikrobiální flóru sputa a některých jeho buněk. Z posledně jmenovaných je nejdůležitější stanovení maligních nádorových buněk.

Hnisavé částice sputa sesbírané ze 4–6 různých míst se umístí na sklo, opatrně se rozetřou dalším sklíčkem na homogenní hmotu, vysuší na vzduchu a fixují nad plamenem hořáku.

Barvení pro studium krvinek ve sputu - barvení podle Romanovského - Giemsa.

Barvení pro bakterioskopické vyšetření - Gramovo barvení - pro rozpoznání streptokoků, stafylokoků, diplokoků, diplobacilů a dalších mikroorganismů.

Gram pozitivní (modrá)

gramnegativní (červená)

Barvivo Romanovsky-Giemsa se používá k detekci atypických buněk. Někdy lze houbovou flóru nalézt v barveném nebo nebarveném přípravku.

Pro detekci mykobakterií (AFB - acidorezistentní mykobakteria) - barvení podle Ziehla - Nielsena.

Barvení podle Romanovského-Giemsy.

Komplexní způsob barvení prvoků, živočišných buněk různých typů, ale i některých bakterií. Barvivo se skládá z eosinu, methylenové modři a azuru rozpuštěných v methanolu nebo ve směsi methanolu a glycerolu. Působí polychromně, acidofilní struktury barví v různých tónech červené, bazofilní struktury v tónech od fialové po modrou. Před použitím se komerční barvivo zředí v destilované vodě. voda nebo 0,01% fosfátový pufr s pH 7 až 5 - 20% objemových koncentrací (obvykle 1-2 kapky na 1 ml ředidla). Pro barvení se stěr fixovaný v tekutém fixativu ponoří na 40-60 minut do krabičky s barvivem, promyje se ve sklenici tlumivým roztokem po dobu 30 s, důkladně se suší a mikroskopuje.

buněčné prvky

Leukocyty. Ve sputu se nacházejí stejné typy leukocytů jako v krvi: neutrofily, lymfocyty atd. Na barvených preparátech je žádoucí provést jejich přesné rozlišení.

A) Neutrofily obvykle tvoří většinu buněčných elementů. Jsou rozptýleny po celé přípravě. Od krevních neutrofilů se liší méně pravidelným tvarem: mohou být protáhlé, zploštělé; spoje mezi segmenty jádra jsou většinou přerušeny a buňka jakoby obsahuje 3-4 kulatá jádra. Během destruktivních procesů jsou neutrofily natolik degenerované, že je nelze odlišit od jiných degenerovaných buněk. Protoplazma takových buněk nevnímá dobře barvu. Stupeň degenerace je tím silnější, čím je onemocnění závažnější a déletrvající.

Ostře degenerované neutrofily se nacházejí v brophoektazích, tuberkulózních kavernách, plicních abscesech. Jejich výskyt ve velkém počtu je známkou zhoršení procesu a v případě zápalu plic by měl vyvolat podezření na počínající tvorbu abscesu. Naproti tomu zvýšení počtu dobře zachovaných neutrofilů je příznivým příznakem a obvykle doprovází klinické zlepšení. U dobře zachovaných neutrofilů je zrnitost často obarvena azurovým eosinem v čistě růžové barvě a může vést k záměně s eozinofilní zrnitostí, liší se pouze tím, že je malá, tečkovaná.

B) Eosinofily. Buňky jsou zcela vyplněny hrubými granulemi. Tyto buňky lámou světlo a zdá se, že září. Na rozdíl od krevních eozinofilů obsahuje sputum často eozinofily s jedním kulatým jádrem.

Eozinofily ve sputu jsou obvykle velmi nerovnoměrně distribuovány. Na některých místech leží v hromadách nebo pramenech, které se mohou táhnout přes několik zorných polí. Eozinofilní zrna jsou často rozptýlena kolem buněk. Na jiných místech při prohlížení řady zorných polí nelze nalézt jediný eozinofil. K jejich nalezení je proto nutné pečlivě vybrat materiál a prozkoumat celý přípravek a někdy i více než jeden.

Obsah velkého množství eozinofilů je charakteristický pro bronchiální astma, u kterého mohou tvořit až 60–90 % všech leukocytů. Najdeme je také u tzv. eozinofilní bronchitidy, hemoragického plicního infarktu, někdy u tuberkulózy, rakovinných metastáz v plicích a zpravidla u helmintických plicní léze(echinokok, plicní distoma).

C) Lymfocyty na rozdíl od neutrofilů a eozinofilů mohou být pouze hematogenního, ale i tkáňového původu - z lymfoidní tkáně hltanu a bronchiální sliznice. Oba jsou morfologicky totožné s krevními lymfocyty. U akutních plicních onemocnění se lymfocyty ve sputu téměř nikdy nenacházejí; u tuberkulózy jsou také velmi malé. U velkého počtu z nich byl zjištěn černý kašel.

D) Bazofily, monocyty se vyskytují příležitostně v jednotlivých kopiích.

atypické buňky

Jsou to velké buňky neobvyklého nevzhledného tvaru, obsahující jedno nebo více jader. Jsou detekovány ve sputu maligních nádorů, což ukazuje na rozpad nádoru a jeho endobronchiální růst, ačkoli frekvence jejich detekce u rakoviny plic je nízká. Občas lze u pacientů s chronické formy plicní tuberkulóza a výrazná proliferativní tkáňová reakce. Je třeba také připomenout, že mnohojaderné epiteliální buňky, tvarově velmi podobné atypickým buňkám, mohou být detekovány s těžkou metaplazií bronchiálního epitelu u pacientů s chronickou bronchitidou.

Gramova skvrna

Bakterie se podle Grama barví hlavními barvivy – genciánovou nebo metylovou violeťou apod., poté se barvivo fixuje roztokem jódu. Po následném promytí obarveného přípravku alkoholem se ty druhy bakterií, které se ukázaly být silně zbarvené, nazývají grampozitivní bakterie (označované Gram (+)), na rozdíl od gramnegativních (Gram (-)), které při praní odbarví.

Gram-pozitivní mikroorganismy se barví fialově nebo fialově s modrým nádechem, Gram-negativní mikroorganismy se barví červeně.

A) Pneumokok (Frenkel diplococcus) (Pneumokok). Pneumokok. Diplococcus kopinatý. Dva koky, ze kterých se skládá, jsou proti sobě s tupými konci, přičemž jejich volné konce jsou špičaté nebo protáhlé ve formě plamene svíčky. Někdy se vyskytují diplokoky, skládající se ze dvou správně oválných nebo dokonce kulatých koků. Za příznivých podmínek lze kolem každého páru koků nalézt cap-ula.

Pneumokok je imobilní, Gramovo barvení je pozitivní. K detekci pneumokoka ve sputu se vyšetřuje tenký Gramově obarvený nátěr. Pneumokoky v takovém nátěru jsou obarveny tmavě fialovou, na rozdíl od buněčných elementů a pozadí obarvené další růžovou barvou. Bakterioskopický výzkum může mít význam pouze v těch případech, kdy je pneumokok obsažen ve velkém množství, jako v čisté kultuře.

B) Pneumobacterium Friedlander (Bacterium Friedlanderi, Klebsiella pneumoniae). Pneumobakterie jsou krátké vejčité tyčinky, spojené do párů a většinou, i když ne vždy, obklopené pouzdrem. Stejně jako pneumokoky jsou nepohyblivé, ale na rozdíl od pneumokoků jsou gramnegativní. Friedlanderova pneumobakterie mohou způsobit pneumonii podobnou klinickému obrazu lobární pneumonie. Sputum s ním však nemá specifický charakter, nejčastěji je hlenovitě hnisavé, někdy s příměsí krve.

B) Streptococcus (Streptococcus). Streptokok má podobu různě dlouhých řetízků, které se skládají z malých, většinou kulatých koků. Stejně jako pneumokok je streptokok nepohyblivý a grampozitivní, streptokok může být také původcem zápalu plic.

D) Bakterie chřipky (Haemophilus influenzae) je jedním z nejmenších mikroorganismů známých v bakteriologii. Bakterie je nepohyblivá, barví se všemi anilinovými barvivy, odbarvuje se dle Grama.

Chřipková hůlka, která není původcem chřipky, stále hraje roli v tomto onemocnění. Podle některých autorů zvyšuje patogenitu viru chřipky. Pro výzkum musíte vzít pouze čerstvé sputum, protože když stojíte, tyčinky poměrně rychle zmizí.

Mořidlo Ziehl-Nielsen

MBT "odolný vůči kyselinám". Na rozdíl od jiných bakterií jsou mykobakterie schopny zadržet barviva (anilinové barvivo fuchsin) i po ošetření odbarvovacím roztokem kyselého alkoholu nebo 25% kyseliny.

Aby se barvivo dostalo do bakteriální buňky buněčná stěna poškozené fenolem. V případě mikroskopie Ziehl-Neelsen se používá zahřívání nátěru.

Pro usnadnění rozpoznání acidorezistentních bakterií mikroskopem se používá kontrastní barvení pozadí.

Mykobakterie jsou buď rozptýleny po preparátu jako jednotlivé vzorky, nebo se vyskytují v malých skupinách. Jejich délka je různá - od 0,002 do 0,006 mm. Bakterie jsou z velké části rovné, někdy jsou však zakřivené, jakoby zlomené, někdy se skládají z jednotlivých zrn.

přímá (jednoduchá) mikroskopie (barvení Ziehl-Nielsen) umožňuje detekovat mykobakteria, když je jejich obsah více než 5000-10000 mikrobiálních tělísek v 1 ml materiálu.
Metoda: rychlá, jednoduchá, efektivní;
umožňuje zobrazit patogen, ale neumožňuje odlišit MBT od atypických mykobakterií.

Výsledky studia acidorezistentních mykobakterií pomocí jednoduché stěrové mikroskopie.

Negativní – AFB nebyla detekována ve 300 zorných polích

Výsledek se nehodnotí - 1-2 AFB ve 300 zorných polích

Pozitivní - 1-9 AFB ve 100 zorných polích.

Pozitivní + - 10-99KUM ve 100 zorných polích