Vyšetření trusu. Metody laboratorní diagnostiky helmintů
Lékařsky důležité jsou tři skupiny helmintů - háďátka(škrkavky) cestody(tasemnice) a trematoda(štěnice).
Pro druhovou identifikaci vajíček helmintů se používají následující vlastnosti.
1. Rozměry. Změřte délku a šířku vajec, která mají obvykle pro každý druh specifickou velikost.
2. Formulář. Každý druh má svůj specifický tvar vajíčka.
3. Stádium vývoje při vypuštění do vnějšího prostředí. U některých druhů se vejce skládají z jedné buňky; jiné mohou mít několik buněk ve vejci; u ještě jiných jsou vajíčka obvykle embryonální (tj. obsahují larvy), když jsou vylučována trusem do vnějšího prostředí. Občas, pokud jsou vzorky stolice vyšetřeny několik hodin nebo 1-2 dny po defekaci, vajíčka helmintů se vyvinou do více dospělých stádií. V ideálním případě by měly být k analýze přijímány pouze čerstvé vzorky stolice.
4. Tloušťka skořápky vejce. Vejce některých druhů, jako je Ascaris, mají tlustou skořápku; u jiných typů helmintů, jako jsou měchovci, je skořápka vajec tenká.
6. Dostupnost morfologické znaky jako jsou uzávěry, hroty, zátky, háčky nebo vroubkovaný vnější plášť.
Pokud se najde vajíčko helminta nebo jemu podobný předmět, měly by být všechny výše uvedené příznaky pečlivě vyhodnoceny, aby bylo možné stanovit konkrétní diagnózu.
Aby bylo možné stanovit druhovou identitu vajíček helmintů, je nutné určit jejich velikost, tvar, stádium vývoje, tloušťku skořápky, barvu a přítomnost morfologických znaků, jako jsou čepice, hroty, zátky, háčky a hlízovitá vnější skořápka .
Ke stanovení specifické diagnózy se používají speciální determinanty a schematická znázornění vajíček helmintů.
Rýže. 34.2. Relativní velikost, tvar a struktura vajíček helmintů.
1. VYŠETŘENÍ trusu.
Helmintologické studie se provádějí k diagnostice helminthiáz detekcí vajíček, larev, dospělých helmintů nebo jejich fragmentů v patologickém materiálu. Vzhledem k tomu, že většina helmintů ve zralém stádiu vývoje je lokalizována v gastrointestinálním traktu nebo v orgánech s ním komunikujících, nejčastěji se používají makro- a mikrohelmintoskopické metody pro vyšetření stolice (ne starší než jeden den).
Pro zvýšení spolehlivosti vyšetření by měly být analýzy opakovány několikrát denně v intervalu 1-3 dnů.
1.1. MAKRO HELMINTOSKOPICKÉ STUDIE FEELŮ
Způsob usazování. Denní porce fekálií se důkladně promyje vodou, dokud se voda nad sedimentem nevyčistí. Po odvodnění horní vrstvy se sediment přenese do Petriho misky a prohlédne se na tmavém pozadí pod lupou nebo pouhým okem.
Screeningová metoda. Výkaly smíchané s vodou jsou umístěny na sítovém systému speciálního zařízení. Po promytí vodou z vodovodu se síta obrátí a po vymytí obsahu do Petriho misek se na ně dívá pouhým okem nebo pod lupou.
1.2. MIKRO HELMINTOSKOPICKÉ STUDIE
K detekci vajíček helmintů a jejich larev se používají helmintovoskopické a helmintolarvoskopické metody.
1.2.1. HELMINTHOVOSKOPICKÉ METODY
Při použití helmintoovoskopických metod pro detekci helmintů se nejprve připraví dva druhy nátěrů - rodák a tlustý .
Þ Nativní nátěr. Malé množství fekálií se rozetře na podložním sklíčku v kapce 50% roztoku glycerolu nebo převařené vodě. Velké částice se opatrně odstraní, směs se překryje krycím sklíčkem a zkoumá se pod mikroskopem (prohlížejí se dva nátěry).
Při vytváření nativního nátěru byste si měli uvědomit, že se slabými invazemi se v něm zřídka nacházejí vajíčka helmintů.
Þ Hustý potřít celofánem podle Kato. Metoda je založena na detekci vajíček helmintů v hustém nátěru výkalů, vyčeřených glycerinem a zbarvených malachitovou zelení. Připravený hustý nátěr výkalů se překryje kouskem celofánu navlhčeným ve směsi glycerin-fenol vlhkého celofánu. Droga se vyšetřuje po 30–60 minutách, kdy mírně zaschne a projasní se, v důsledku čehož lze vajíčka helmintů snadno detekovat pod mikroskopem s malým zvětšením.
Ve velkém nátěru jsou jasně viditelná barevná velká vajíčka helmintů a průhledná vajíčka tasemnice pygmy jsou poněkud horší. Tato metoda není vhodná pro detekci malých vajec.
Þ Metody obohacení
Mezi způsoby obohacování se používají metody flotace (plovoucí) a sedimentace (srážky).
A). Flotační metody založené na použití nasycených roztoků různých chemikálií, ve kterých vajíčka plavou díky rozdílu v měrné hmotnosti.
Füllebornova plovoucí metoda založené na plavení vajíček helmintů v nasyceném roztoku chlorid sodný(měrná hmotnost 1,18), což umožňuje detekovat vajíčka s malým počtem z nich. Metoda je účinnější než studium nativního nátěru. Výhodou je dostupnost a nízká cena. Tato metoda dobře odhaluje vajíčka háďátek a tasemnice pygmy.
Vajíčka motolice, taeniidy, neoplozená vajíčka ascaris však v tomto roztoku neplavou. Proto je nutné zkoumat nejen povrchový film, ale i nános, který metodu komplikuje. Nevýhody zahrnují opožděné vylíhnutí vajíček: vajíčka tasemnice pygmy vylézají po 15-20 minutách, ascaris - po 1,5-2 hodinách, bičíkovce - po 2-3 hodinách.
Metoda E.V.Kalantaryan také metoda obohacování, ale účinnější a jednodušší. Použije se nasycený roztok dusičnanu sodného o relativní hustotě 1,38. Vajíčka většiny helmintů proto vyplavou na povrch a nacházejí se v povrchovém filmu, vyšetření sedimentů není nutné.
Nevýhodou metody je nedostatek dusičnanu sodného a také to, že vajíčka motolice, taeniidní onkosféry nevyplavou a zůstávají v sedimentu.
B). Způsob sedimentace (sedimentace) helminth vejce jsou založena na použití chemikálií, které rozpouštějí tuky a bílkoviny ve výkalech.
Metoda P. P. Goryacheva na principu usazování vajec. Nátěr je v tomto případě světlý, což usnadňuje detekci malých vajíček motolice.
Pro detekci vajec byla navržena Gorjačovova metoda opisthorchia a ukázalo se, že je účinnější než studium nativního nátěru a Füllebornovy metody. V současné době se pro diagnostiku opisthorchiázy (klonorchiázy) doporučují metody Kato a Kalantaryan, které jsou poměrně účinné a technicky jednodušší.
1.2.2. HELMINTHOLARVOSKOPICKÉ METODY (detekce larev)
Metoda kroucení podle E.S. Shulmana. Metoda byla navržena především pro detekci larev helmintů ve výkalech strongyloidy. Vyšetřují se pouze čerstvě vyloučené výkaly, které se tyčí rozmíchají v 5násobném množství vody. Po 20-30 sekundách od začátku míchání se tyčinka rychle vyjme, kapka kapaliny vytvořená na jejím konci se přenese na podložní sklíčko a podrobí se mikroskopování.
Bermannova metoda je založena na schopnosti larev helmintů migrovat za teplem a slouží k jejich detekci ve stolici, především při podezření na strongyloidózu.
2. METODY STUDOVÁNÍ JINÝCH VÝKAZŮ A TAJEMSTVÍ
V duodenálním obsahu se mikroskopicky zkoumají vločky a husté vměstky v něm a poté se nalitím do zkumavek přidá stejný objem etheru síry, odstředí se a prozkoumá se sediment.
Ve zvratcích se občas najdou helminti nebo jejich úlomky (např. při průniku hnisající echinokokové cysty z plic do průdušek se zvracením se uvolňuje světlá vodnatá nebo hnisavá tekutina). Diagnóza je stanovena na základě průkazu fragmentů kutikulární membrány, skolexu a háčků echinokoka.
Studie moči.
Urogenitální schistosomiáza je diagnostikována identifikací vajíček a miracidií. Vajíčka původce urogenitální schistosomózy (Schistosoma haemotobium) jsou velká a dosahují délky 120-150 mikronů, na jednom konci mají koncový hrot. Uvnitř vajíčka můžete vidět embryo (miracidium). Někdy je nutné zjistit, zda jsou nalezená vejce životaschopná. To lze zjistit, pokud je přípravek čerstvý a nebyly do něj přidány žádné konzervační látky. U chronické formy schistosomiázy u pacientů se krev uvolňuje na konci močení, ale vajíčka se v moči nacházejí jen zřídka, v důsledku čehož se doporučuje uchýlit se k biopsii močového měchýře.
Do moči se dostávají vajíčka paragonimu, který žije hlavně v plicích, v případě lokalizace v ledvinách, močovodech, stěnách močového měchýře. Mikrofilárie se nacházejí v chylózní moči.
Vyšetření sputa.
Sputum může obsahovat vajíčka paragonimu, schistosomy, larvy migrujících háďátek, fragmenty echinokokového měchýře. U některých helmintiáz jsou pozorovány charakteristické změny ve sputu. Na paragonimiáza například ve sputu lze nalézt shluky vajíček ve formě nažloutlých hrudek.
Před provedením terapeutických a preventivních opatření pro některé helmintiázy zemědělských a lovných zvířat je nutné včas provést přesnou diagnózu onemocnění. Existují dvě skupiny metod diagnostiky helmintiáz – intravitální a postmortální. Kromě toho je třeba umět odlišit helmintiázy a další invazivní, ale i infekční onemocnění.
Intravitální diagnostika helmintiáz
Diagnóza helmintiáz během života zvířat se provádí na základě výsledků laboratorních výzkumných metod a diagnostického odčervení (přímé metody), jakož i imunobiologických reakcí (nepřímé metody). Pomocnou roli v diagnostice helminthiáz hrají údaje ze studií mezihostitelů (s biohelminthiasami), klinických a epizootologických pozorování. Hlavními diagnostickými metodami jsou laboratorní testy, které často umožňují odhalit patogeny helmintiáz nebo jejich vajíčka a larvy v exkretech (trus, moč, sputum), sekretech (žluč), tkáních (krev, svaly), orgánech (kousky kůže ), v obsahu teček a abscesů .
Laboratorní metody diagnostiky helmintiáz u zvířat jsou snadno proveditelné a poměrně přesné, takže jsou široce používány ve výrobních podmínkách (ve veterinárních laboratořích a dalších veterinárních institucích). V závislosti na zamýšleném účelu jsou laboratorní studie rozděleny na helminthoovoskopické, helmintolarvoskopické a helmintoskopické výzkumné metody.
Helmintolarvoskopické metody výzkum se používá k detekci larev helmintů (dictyocaul, mullerium atd.). Z této skupiny se často využívá studium výkalů podle metod Bermana-Orlova a Vaida.
Helmintoskopie nebo makrohelmintoskopie studie slouží k diagnostickým účelům k detekci externě vypuštěných helmintů nebo jejich fragmentů (segmentů hnízd). V praktických podmínkách tato metoda stanovuje diagnózu pro askariózu prasat, drepanidotenózu u hus a další helmintiázy.
Z laboratorních metod diagnostiky helminthiáz u zvířat mají velký praktický význam: a) helmintokoprologické studie (vyšetření trusu); b) studium sekretů z jiných orgánů; c) výzkum tkání.
Helmintokoprologické studie
Pro stejné účely je navrženo speciální zařízení, sestávající z ocelových odboček, přechodových odboček a dvou polokulových ploch připevněných k odbočkám. Odběr trusu z konečníku zvířat pomocí tohoto zařízení usnadňuje práci veterinárním pracovníkům a zvyšuje produkční kulturu této manipulace.
U králíků se výkaly v množství několika kuliček odstraňují tlakem na břišní stěnu v konečníku. Někdy je přípustné odebrat vzorky trusu z podlahy, pokud jsou čerstvé a je známo od kterého zvířete. Od jednoho zvířete odeberte alespoň 10-20 g trusu. Od ptáků, kožešinových zvířat, psů, koček a volně žijících predátorů (v zoologických zahradách) jsou sbírány výkaly z čisté podlahy klecí (skupinové vzorky).
Všechny vzorky trusu jsou označeny: podél okraje sáčku nebo listu papíru (kde se nedostanou do kontaktu s exkrementy) napíší jednoduchou tužkou číslo vzorku (někdy i jméno krav). Ke vzorkům výkalů je připojen inventář, který uvádí název farmy, brigády, druh, pohlaví a věk zvířat (u dospělých - přezdívka nebo inventární číslo) a datum odběru. V průvodní poznámce je žádoucí uvést účel fekálních studií (např. kontrolovat prováděné odčervování). Je nutné pokusit se rychle dopravit vzorky stolice do veterinární laboratoře a bez prodlení je vyšetřit, protože při pokojové teplotě po 16-20 hodinách vylézají z vajíček střevních strongylátů larvy, což ztěžuje diagnostiku diktyokaulózy a protostrongylidózy, stejně jako další helmintiázy.
Pokud se vzorky stolice nevyšetřují v den odběru, umístí se do chladničky nebo sklepa při teplotě nepřesahující 10 °. Dezinfekční prostředky nezastaví vývoj larev uvnitř vajíček helmintů. Výsledky studia výkalů jsou zaznamenány ve speciálním časopise.
Zařízení pro helmintokoprologický výzkum. Spolehlivost helmintokoprologických studií do značné míry závisí na kvalitě laboratorního vybavení. V roce 1968 byla na Ukrajině vyvinuta sada standardního vybavení pro hromadné studium výkalů pro helmintiázy. Skládá se z předmětů vyrobených převážně z nárazuvzdorného polystyrenu ve dvou barvách, které se snadno čistí a neutralizují (odolají varu) a také se snadno přepravují. Sada obsahuje kelímky různé kapacity, nálevky, kónické zkumavky, sítka různých velikostí, stojánek s pěti tyčemi (každá na šest nálevek), kyvetu (dle velikosti stojánku), boxy na uchovávání nádobí a také jako gumové hrušky, skleněné tyčinky a kovové smyčky (obr. 1).
Na rozdíl od dříve používaného heterogenního vybavení nový set zvyšuje efektivitu laboratorních studií trusu a produktivitu veterinárních pracovníků, umožňuje rozsáhlejší kvantitativní helmintokoprologické studie standardizovanými metodami (kontrola odčervení) a zlepšuje i estetickou stránku této práce.
Rozlišovat mezi kvalitativními a kvantitativními metodami výzkumu fekálií.
Kvalitativní helmintokoprologické studie
Kvalitativní výzkumné metody umožňují zjistit, kterými helminty jsou zvířata infikována.
Helmintovoskopické metody. Pro celoživotní diagnostiku helmintiáz bylo navrženo velké množství metod helmintoovoskopie, z nichž budeme uvažovat pouze ty, které jsou častěji využívány ve veterinární praxi.
Většina helmintokoprologických diagnostických metod je založena na rozdílu měrné hmotnosti vajíček, larev helmintů nebo jejich fragmentů na jedné straně a kapaliny, ve které je trus suspendován, na straně druhé. Podle poměru měrné hmotnosti těchto složek se rozlišují způsoby flotační, sedimentační a kombinované.
flotační metody. U flotačních (plovoucích) metod se používají kapaliny (nasycené solné roztoky), jejichž měrná hmotnost je větší než hmotnost vajíček helmintů. V laboratorní praxi se nejvíce používá nasycený roztok kuchyňské soli (měrná hmotnost 1,18). K přípravě takového roztoku se do hrnce s vroucí vodou za míchání postupně přidává chlorid sodný, dokud se na dně nevytvoří malá sraženina (na 1 litr vody se odebere asi 400 g chloridu sodného). Horký roztok se přefiltruje do láhve přes několik vrstev gázy nebo vaty a po vychladnutí se použije (na dně láhve by se měla vytvořit krystalická sraženina).
Méně běžně se ve veterinárních laboratořích používají nasycené roztoky síranu hořečnatého o měrné hmotnosti 1,35 (920 g na 1 litr horké vody), hyposiřičitanu sodného o měrné hmotnosti 1,37 až 1,41 v závislosti na okolní teplotě (1 750 g na 1 l horké vody) a dusičnanu sodného o měrné hmotnosti 1,4 (poměr ledku a horké vody je 1:1).
Füllebornova metoda vyznačuje se snadnou implementací a vysokou účinností u většiny hlístic a cestodóz zvířat, proto se řadí na první místo mezi ostatními helmintokoprologickými diagnostickými metodami. 3-5 g fekálií se vloží do skleněného, polystyrenového nebo plastového kelímku o objemu 50-100 ml a za míchání skleněnou tyčinkou se postupně přidává nasycený roztok kuchyňské soli (chlorid sodný) rychlostí 15-20 dílů flotační kapaliny na jeden díl fekálií. Husté ovčí výkaly mohou být nejprve rozemlety s malým množstvím solného roztoku v porcelánovém hmoždíři, poté se suspenze nalije do sklenice a přidá se požadované množství roztoku chloridu sodného. Naplavené velké částice se ihned odstraní tyčinkou a suspenzi výkalů je vhodné přefiltrovat do jiné sklenice přes sítko (někdy používají sítka na mléko). Po usazení nabitého vzorku po dobu 45-60 minut se pomocí kovové smyčky odstraní tři kapky povrchového filmu, umístí se na podložní sklíčko a mikroskopují se bez krycího sklíčka. Po každém testu se smyčky umyjí ve sklenici vody (místo pálení na alkoholové lampě doporučené v některých návodech).
Kalantariánská metoda- Modifikovaná Füllebornova metoda. Jako flotační kapalina se používá nasycený roztok dusičnanu sodného. Doba usazení suspenze je 15-30 minut. Používá se pro diagnostiku a akanthocefalózu.
Depoziční metody. Usazovací metody využívají kapaliny s nižší měrnou hmotností než vejce.
Metoda sekvenčního praní. Malé množství fekálií (5 g) se rozmíchá ve sklenici s 10násobným množstvím vody. Směs se přefiltruje do velké sklenice a přidá se voda, načež se filtrát nechá 5 minut usazovat. Poté se horní vrstva kapaliny vypustí nebo odsaje injekční stříkačkou k sedimentaci; ke sraženině se přidá stejné množství vody, promíchá se a znovu usadí po dobu 5 minut. Tyto manipulace se opakují, dokud se horní vrstva kapaliny ve skle nevyjasní. Kapalina se naposledy vypustí a sraženina se umístí na sklo nebo do bakteriologické misky a prozkoumá se pod mikroskopem. Tato metoda se často používá k diagnostice většiny trematod a akanthocefalózy.
Gorškovova metoda založeno na principu sedimentace s následným zahuštěním vajíček helmintů. 150-300 g koňských výkalů se umístí na kovové síto nebo gázu ve velké skleněné nálevce o průměru v horní části 15-20 cm, nasadí se pryžová hadička o délce 10-15 cm se sponou na konci spodní konec trychtýře. Feces se uvolní a nalijí na vrchol teplou vodou. Výkaly v nálevce se uchovávají od 4 hodin do jednoho dne, poté se svorka opatrně otevře, část kapaliny se uvolní do centrifugačních zkumavek a odstřeďuje se 3 minuty. Poté se kapalina vypustí a sraženina se zkoumá pod mikroskopem. Tato metoda se používá k diagnostice drasciózy a habronematózy koní.
Kombinované metody. Jsou založeny na principu sedimentace a flotace vajíček helmintů, proto jsou ve srovnání s předchozími výzkumnými metodami účinnější. Tyto metody mají vzhledem ke své složitosti poměrně omezené uplatnění v průmyslových podmínkách.
Drahá metoda. Malé množství fekálií (3-5 g) se rozmíchá ve sklenici s 20-30 ml vody, směs se přefiltruje do centrifugačních zkumavek a centrifuguje 1-2 minuty, poté se slije horní vrstva kapaliny, a k sedimentu se přidá směs stejných dílů glycerinu a chloridu sodného. Směs ve zkumavkách se protřepe a podruhé odstředí. Vajíčka, která vyplavala na hladinu, se odstraní spolu s filmem suspenze drátěnou smyčkou, setřesou se na podložním sklíčku a podrobí se mikroskopování. V nepřítomnosti glycerinu lze výkaly smíchat s nasyceným fyziologickým roztokem před sekundární centrifugací.
Šcherbovičova metoda. Technika vyšetření výkalů je podobná předchozí metodě. Liší se od něj tím, že před sekundární centrifugací se do sedimentu přidává nasycený roztok hyposiřičitanu sodného (s makrakantorhynchózou prasat) nebo síranu hořečnatého (). Oproti Darlingově metodě je tato metoda efektivnější.
Flotačně-sedimentační metoda Demidov doporučeno pro diagnostiku fasciolózy, ale i jiné trematodózy přežvýkavců. Vzorek trusu (3 g od ovcí a 5 g od skotu) se vloží do sklenice o objemu 200 ml a do ní se nalije nasycený roztok kuchyňské soli a důkladně se promíchá skleněnou tyčinkou. suspenze se nechá usadit 15-20 minut. Hrubé částice, které vyplavaly na povrch, se odstraní papírovou naběračkou a supernatant se odsaje injekční stříkačkou (při zkoumání velkého množství vzorků lze tekutinu vypustit), přičemž na usazeniny zůstane 20-30 ml sedimentu. dno. K sedimentu přidejte vodu do celého objemu sklenice a důkladně promíchejte. Směs se přefiltruje do obyčejné sklenice přes gázu nebo kovové síto a nechá se 5 minut usadit. Supernatant se odsaje, na dně zůstane 15-20 ml sedimentu, který se přenese do kónického kelímku, propláchne se obyčejnou sklenicí a oplach se nalije do malé. Suspenze se usadí v kónické nádobě na 3-5 minut a následně se odsaje kapalina (tento postup se opakuje). Vyčeřená sraženina se přenese na podložní sklíčko a podrobí se mikroskopování. Tato metoda je účinnější než metoda sekvenčního proplachování.
Helmintolarvoskopické metody. Berman-Orlovova metoda. Pro studium výkalů se používá přístroj sestávající ze střední nálevky (plast, polystyren nebo sklo), pryžové trubice (10-15 cm dlouhé) spojené horním koncem s nálevkou, svorky připevněné ke spodnímu konci z pryžové hadičky, kovového síta nebo kousku gázy a stativu (pro jedno nebo více zařízení). Namontovaný přístroj je naplněn teplou vodou (35-38 °). 10-15 g čerstvých výkalů se umístí na síto nebo se zabalí do gázy a opatrně se spustí do nálevky. Výkaly ovcí se uchovávají v přístroji po dobu 2-4 hodin a telat - nejméně 6-7 hodin. Potom se svorka na zkumavce uvolní a protékající kapalina se shromáždí ve zkumavce a odstřeďuje se 2–3 minuty. Poté se horní vrstva kapaliny rychlým nakloněním zkumavky vypustí a kapalina zbývající na dně se přenese na podložní sklíčko a prozkoumá se pod mikroskopem. Použití svorek na pryžové hadičce v Bermanově přístroji je spojeno s nepohodlí, takže v mnoha veterinárních laboratořích jsou spodní konce gumových hadiček přímo spojeny s malými zkumavkami. Před zkoumáním sedimentu pod mikroskopem se kapalina neodstřeďuje.
Trus přežvýkavců lze vyšetřovat na plicní háďátka (zejména v expedičních podmínkách) zjednodušenou metodou helmintolarvoskopie (bez použití nálevek). K tomuto účelu se používají malé polokónické kelímky (50 ml). Vzorky výkalů se umístí na sítka nebo se zabalí do gázy a ponoří se do šálků s vodou. Po několika hodinách se výkaly odstraní, tekutina z kalíšku se odsaje nebo vypustí a sediment se mikroskopicky zkoumá.
Waydova metoda. Několik kuliček výkalů malých přežvýkavců se vloží do bakteriologické misky nebo na hodinové sklíčko a navlhčí se trochou teplé vody. Po 10-20 minutách se výkaly odstraní a zbývající kapalina se zkoumá pod mikroskopem s malým zvětšením. Účinnost této metody je ve srovnání s předchozí metodou mnohem nižší, proto se méně často používá k diagnostice diktyokaulózy a protostrongylidózy u ovcí.
Metoda diferenciální diagnostiky strongylatóz u invazivních larev. Původci většiny střevních strongylatóz mají téměř stejnou strukturu vajíček, proto lze pomocí helminthoovoskopie stanovit pouze skupinovou diagnózu (například strongylatózy).
Pro stanovení přesnější diagnózy (generické) ve veterinárních laboratořích se někdy získává kultura invazivních strongylátových larev. Asi 5 g výkalů se umístí do bakteriologického kelímku, uzavře se víčkem a umístí se do termostatu při teplotě 25-30 ° po dobu jednoho týdne. Poté se trus s larvami vyšetřuje podle Berman-Orlovovy metody (k izolaci invazivních larev z trusu).
Invazní larvy různých rodů střevních strongylátů se liší velikostí těla, stavbou kaudálního konce čepice a počtem střevních buněk. Například larvy jícnu jsou větší (až 1 mm dlouhé), nitkovitý ocasní konec čepice je dlouhý a střevo má 20-32 buněk; larvy hemonka střední délky (asi 0,8 mm), s nitkovitým ocasním koncem čepice, střevo má 16 buněk.
Periodické mytí a usazování výkalů se opakuje, dokud se horní vrstva nevyčistí. Horní vrstva kapaliny se naposledy vypustí a sediment se po malých částech zkoumá v kyvetách s černobílým dnem. Detekovaní helminti se sbírají pomocí pinzety, pitevních jehel a kartáčků, prohlížejí se pod mikroskopem a poté se přenesou do konzervační kapaliny. K identifikaci malých háďátek se sediment navíc po částech zkoumá pomocí binokulární nebo stativové lupy se zvětšením 10-20x.
Kvantitativní helmintokoprologické studie
Standardizovaná Füllebornova metoda méně přesná než Stollova metoda, ale pro svou snadnou implementaci je široce používána ve veterinární praxi ke kontrole účinnosti odčervení zvířat. Podle techniky provedení se standardizovaná metoda podobá jiným metodám kvalitativních helmintoovoskopických studií. Má však řadu vlastností, z nichž hlavní jsou následující: 1) vzorky výkalů musí být stejné; 2) nádobí o jednom objemu; 3) doba sedimentace vodních suspenzí fekálií je stejná; 4) smyčky stejného průměru, studie stejného počtu kapek.
Standardizovanou Berman-Orlovovou metodu lze použít k odhadu intenzity dictyocaulózní a progostrongylidózní invaze u přežvýkavců. Spolehlivost výsledků se zvyšuje s rostoucím počtem a četností studií.
Vyšetření sekretu z jiných orgánů
Studium obsahu spojivkových dutin slouží k diagnostice thelaziózy skotu (patogen - Thelazia rhodesi). Z injekční stříkačky vyplachujte spojivkové dutiny vodným roztokem jódu; protékající tekutina se shromažďuje v kyvetě nebo koxě ledvinovitého tvaru a vyšetřuje se na přítomnost telat. V tomto případě má vodný roztok jódu také terapeutický účinek.
Studium výtoků z kloaky se provádí pro celoživotní diagnostiku. Unikající hlen se umístí na podložní sklíčko a zkoumá se pod mikroskopem, aby se detekovala vajíčka patogenu.
Studium škrábanců z perianálních záhybů je hlavní diagnostickou metodou. Špachtlí nebo zápalkou navlhčenou ve směsi stejných dílů glycerinu a vody se provede seškrab z perianálních záhybů hráze a vnitřního povrchu kořene ocasu. Seškrábání se přenese na podložní sklíčko v kapce glycerinu s vodou, překryje se krycím sklíčkem a mikroskopuje se. Detekce oxyurových vajíček potvrzuje klinickou diagnózu.
Pro diagnostiku kožní formy drasciózy a habronematózy se doporučuje vyšetření kožních seškrabů z „letních vředů“. Z čerstvě ulcerovaného povrchu kůže se odebere seškrab a vloží se do kapky zředěné kyseliny chlorovodíkové (1:1000). Potom se preparát rozštěpí pitevními jehlami, přikryje krycím sklíčkem a zkoumá se pod mikroskopem, aby se detekovaly larvy drasů nebo habronu.
Výzkum tkání
Studium kůže skotu (podle Gnediny) se používá k diagnostice onchocerciázy. Na spodní břišní stěně zvířete se po přípravě operačního pole vyřízne malý kousek kůže o tloušťce 2 mm (velikost malého zrnka ovsa) a rána se potře jodovou tinkturou. Ve veterinární laboratoři se tento kousek kůže umístí na podložní sklíčko ve fyziologickém roztoku, rozpůlí se pitevními jehlami a poté se vše nalije do centrifugační zkumavky a umístí se na několik hodin do termostatu při teplotě 37-38 °. Poté se odstraní kožní vlákna, kapalina se odstředí a sediment se mikroskopicky zkoumá, aby se detekovaly mobilní mikroonchocerci.
Studium kousků svalů načasto prováděny posmrtně. Někdy se pro celoživotní diagnostiku trichinelózy používá metoda biopsie. Chirurgickým zákrokem se vyřízne kousek svalu (např. z vnějších svalů ucha), ze kterého se připraví malé řezy (s ovesnými vločkami). Ty se umístí na spodní sklo kompresoru, přikryjí se horním sklem a spojí se šrouby až do úplného zploštění. Řezy se prohlížejí pod trichineloskopem, mikroskopem s malým zvětšením, pomocí projekčního trichinoskopu nebo projekční kamery KT-3.
Diagnostické odčervení
Pro diagnostické odčervení se vybere několik zvířat, izoluje se od zbytku populace a podá se jim anthelmintikum v terapeutické dávce. Výkaly izolované během jednoho nebo dvou dnů od těchto zvířat jsou shromážděny a podrobeny helmintoskopickému vyšetření k detekci původce onemocnění. Za produkčních podmínek se často provádí diagnostické odčervení pro celoživotní diagnostiku moniesiózy přežvýkavců, drepanidoteniózy hus, masožravé cestodózy, askariózy prasat a askariózy kuřat.
Imunologické reakce
Alergické kožní reakce byly navrženy pro celoživotní diagnostiku fascioliázy u ovcí, opisthorchiázy masožravců a moniesiózy ovcí, hemonchózy a diktyokaulózy ovcí, onchocerciázy skotu a koní a trichinelózy prasat.
Ze sérologických metod je třeba poukázat na skolexoprecipitační reakci, která umožňuje diagnostikovat raná stádia echinokokózy a precipitační reakci pomocí živých larev ascaris a trichinel k identifikaci odpovídajících helminthiáz.
Studium mezihostitelů helmintů
Výsledky helmintologického vyšetření zvířat by měly být vždy doplněny údaji ze studií o helminthiázách mezihostitelů. Umožňují vám zjistit helmintologickou situaci, předvídat výskyt helmintiáz. Mezihostiteli helmintů mohou být měkkýši (sladkovodní i suchozemští), korýši (kyklopi, dafnie, amfipodi, vodní osli), žížaly, hmyz (mouchy, pakomáři, pakomáři, vážky, mravenci, brouci), půdní roztoči.
Epizootologický význam má hustota (kvantitativní složení) jednotlivých druhů mezihostitelů. Čím vyšší je, tím více příležitostí je pro nabíjení zvířat helmintiázou. Suchozemští mezihostitelé se nacházejí na různých místech (v hromadách hnoje, na výběhech, pastvinách atd.). Vodní mezihostitelé žijí ve velkém množství podél pobřeží stojatých mělkých vodních útvarů, v houštinách rostlin. V těchto místech jsou zvířata (zejména) často infikována helmintiázou.
Mezihostitelé na přítomnost larev helmintů by měli být vyšetřeni v čerstvém (nejlépe živém) stavu pod binokulární lupou nebo mikroskopem s malým zvětšením. Larvální stadia helmintů v těle mezihostitelů jsou v různém stádiu vývoje, ale nejnápadnější jsou infekční larvy. Výsledkem výzkumu je zjištění rozsahu (procenta) a intenzity (množství) invaze mezihostitelů larvami určitých typů helmintů.
Oribatid nebo obrněná, klíšťata (až 1 mm na délku).Žijí v horních vrstvách půdy. Jedná se o mezihostitele přežvýkavců moniesia a dalších helmintů. K detekci larev tasemnic (cysticerroidů) se skořápka oribatidního roztoče nejprve rozdělí na kousky v kapce vody na podložním sklíčku (pod kontrolou lupy), poté se přípravek překryje krycím sklíčkem a mikroskopuje . Cysticerkoidy moniesie jsou zaoblené (0,15-0,19 mm v průměru), vybavené čtyřmi přísavkami a ocasním přívěskem. Jsou velmi jemné, proto byste neměli používat metodu kompresního testování klíšťat.
Žížaly jiných rodů (Criodrilus, Eophila) žijí ve vodních útvarech s bažinatými, bahnitými břehy. Jsou registrováni jako mezihostitelé pro patogeny hystrichózy a porokekózy u kachen. Larva Histrihis je velmi velká (až 3 cm dlouhá), bělavé barvy, průsvitná přes kůži červa ve formě vlnitého pruhu. Larvy Porrocecum jsou desetkrát menší než předchozí larvy (2,5-3 mm); nacházejí se v krevních cévách při kompresorovém studiu žížal pod mikroskopem.
Studium obojživelníků. Amphipodi dosahují délky až 2 cm, žijí v mořských i sladkovodních nádržích. Jsou registrováni jako mezihostitelé patogenů polymorfózy. streptokaróza a tetrameróza ptáků. Larvy se nacházejí v kompresorové studii těchto korýšů. Larvy (acantellas) polymorphus jsou oválné, oranžové, až 1 mm dlouhé, viditelné makroskopicky.
Studie vodních oslů. Vodní osli jsou 1 až 1,5 cm dlouzí, žijí ve sladkovodních nádržích a jsou mezihostiteli původce ptačí filikolózy. Vyšetření kompresorem odhalí larvu (akantellu) bílé barvy, oválného tvaru, 0,7 mm na délku.
Můžete také prozkoumat další mezihostitele (potomáři, pakomáři, mouchy, vážky, brouci, mravenci).
Fluorescenční mikroskopie
Novou metodou diagnostiky helmintiáz je metoda luminiscenční mikroskopie (podle V. G. Evranové). Umožňuje rozlišit stejný typ vajíček různých typů helmintů a také odlišit životaschopná vajíčka a larvy od mrtvých. Dříve byla vajíčka motolic, tasemnic a nematodů ošetřena roztoky akridinové oranže a dalších fluorochromů. Životaschopná vajíčka a larvy háďátek neluminiscují nebo slabě svítí, mrtvá jasně září a jsou zbarvena oranžově, žlutozeleně nebo žlutě.
Luminiscenční mikroskopií je možné odlišit vajíčka hlavních tasemnic masožravců, vajíčka patogenů a heterokidózu kuřat, která, jak víte, mají podobnou strukturu co do velikosti, tvaru a barvy, a také rozlišit mezi životaschopnými a mrtvé oocysty kokcidií.
Preparáty se prohlížejí pod mikroskopem MUF-3 nebo ML-2. Technika luminiscenční mikroskopie je poměrně jednoduchá a lze ji použít ve výrobních podmínkách (veterinární laboratoře).
Z dalších studií, které jsou druhořadé při stanovení diagnózy helmintiáz. lze poukázat například na objasnění morfologického složení krve (přičtení eozinofilie), metodu pro stanovení proteinové frakce.
Stručný popis vajíček helmintů
Vejce zástupců různých tříd se liší velikostí, barvou, tvarem, strukturou skořápek a vnitřním obsahem.
Vejce motolice.Často oválného tvaru s víkem na jedné tyči. Skořápka je hladká. U některých druhů je skořápka vybavena vlákny (procesy), tuberkulami. Zbarvení vajec od světle šedé po hnědou (obvykle žlutou).
Cestode vejce. Existují dva typy: tasemnice a tasemnice. V postní době připomínají vajíčka motolice (ovál s víčkem). Vajíčka tasemnic se svou strukturou výrazně liší od vajíček helmintů jiných tříd: jsou často středně velká, zaoblená, šedá, zralá (uvnitř embrya je onkosféra se třemi páry embryonálních háčků).
Vejce háďátek. Od vajíček motolice se liší tím, že nemají čepici; z vajíček tasemnic - nepřítomnost onkosféry.
Velikost, tvar, struktura a barva skořápek vajíček háďátek je velmi různorodá. Vnější obal je hladký, hrbolatý, buněčný: tloušťka skořápek se liší od tenkých (u strongylátů) po tlusté (u trichocefalů). U většiny háďátek jsou vajíčka oválného tvaru, symetrická, u některých lindrická (v čárkách). Většina hlístic uvolňuje nezralá vajíčka v předsegmentační fázi nebo několik štěpných kuliček, menšina je zralá (uvnitř vajíčka se tvoří larva).
Škrabka vejce. Mají oválný, elipsoidní a vřetenovitý tvar a jsou středně velké až velké. Vajíčka vypuštěná do vnějšího prostředí obsahují uvnitř larvu - akantor s deseti embryonálními háčky (zralé).
Klinická pozorování
epidemiologická data
Při diagnostice mnoha helmintiáz hospodářských zvířat poskytují významnou pomoc epizootologická data (špatný zdravotní stav farmy pro konkrétní choroby, roční období, věk nemocných zvířat, charakter pastvin a vodních zdrojů, meteorologické podmínky atd.) . Například hromadné onemocnění se známkami abdominální vodnatelnosti a úhynem ovcí na podzim po deštivém létě a využívání mokřadů pro pastvu dává důvod k podezření na akutní formu fasciolózy. Nemoc housat v létě se známkami zažívacích potíží (průjem) a nervové soustavy (paréza) po pastvě na mělkém stojatém rybníku, hojně osídleném kyklopy, je základem pro stanovení předpokládané diagnózy drepanidotenióza. Úhyn jehňat na jaře (3-4 týdny po zahájení pastvy) by měl vyvolat podezření na onemocnění mladých ovcí moniesiózou. Je také nutné vzít v úvahu zonální znaky helminthiáz u domácích zvířat, nejlépe v kombinaci s klinickým pozorováním.
Nejčastěji k infekci helminty dochází kontaminovaným jídlem, vodou a také nemytýma rukama.
Přímé a nepřímé metody diagnostiky helmintiáz
K dnešnímu dni bylo vyvinuto mnoho metod diagnostika helmintiázy, ale všechny lze rozdělit do dvou velkých skupin: přímé a nepřímé. Přímé diagnostické metody zahrnují ty studie, které umožňují přímo identifikovat helminty, jejich fragmenty, larvy nebo vajíčka. Nepřímé metody diagnostiky helmintiáz jsou založeny na identifikaci sekundárních změn charakteristických pro konkrétní odrůdu helmintiáz.
Nejoblíbenějšími přímými metodami pro diagnostiku helmintiáz jsou makro- a mikrohelmintoskopické výzkumné metody.
Makrohelmintoskopické metody výzkumu
Otázky čtenářů
18. října 2013, 17:25 Dobré odpoledne. Už asi rok pociťuji svědění kolem řitního otvoru. Bez bolesti. Řekněte mi, na koho se obrátit a co by to mohlo být? Děkuju
Položit otázkuMetody výzkumu mikrohelmintoskopie
Imunologické výzkumné metody
Diagnostika helminthiáz je založena na průkazu specifických protilátek proti určitým helmintům v krevním séru. Pro imunologický výzkum se používá metoda nepřímé hemaglutinace, enzymatická imunoanalýza, imunoelektroforéza, imunoabsorpce a další sérologické metody krevních testů.
Imunologické metody výzkumu se používají k diagnostice alveokokózy, echinokokózy, cysticerkózy, askariózy, schistosomiázy a dalších helmintiáz.
Analýza obsahu žluči a duodena
Biopsie
Elektropunkční diagnostika
Elektropunkční diagnostika je založena na analýze odporu kůže při podráždění slabým elektrickým proudem. Elektropunkční diagnostiku suspektní helmintiázy lze provádět dvěma způsoby: Vollovou metodou nebo rezonančním vyšetřením.
Metody instrumentálního výzkumu
S helmintiázami se také provádí ultrazvuk, FEDGS a počítačová diagnostika. Tyto metody umožňují určit stupeň poškození způsobeného helminty a také určit stav jednotlivých orgánů.
Pro detekci fragmentů helmintů se výkaly prohlížejí nahé, poté se smíchají s vodou a po malých částech se zkoumají v Petriho misce na tmavém pozadí. Všechny podezřelé částice se umístí na podložní sklíčko do kapky vody a zkoumají se pod lupou. Denní porci můžete umístit do válce s přidáním 5-10násobného množství vody. Po promíchání se nádoba ponechá až do úplné sedimentace suspendovaných částic. Povrchová vrstva kapaliny se vypustí a nalije se čistá voda. Promytá sraženina se po malých částech prohlíží pouhým okem nebo pod lupou. K průkazu vajíček se používají mikroskopické vyšetřovací metody.
Metoda nativního nátěru. Malé množství stolice z různých míst testovací části se rozetře na podložním sklíčku v kapce 50% roztoku glycerolu, izotonického roztoku chloridu sodného nebo vody. Směs se překryje krycím sklíčkem a prohlédne se pod mikroskopem.
Füllebornova plovoucí metoda. Jedna část výkalů se smíchá s 20 díly nasyceného roztoku chloridu sodného (měrná hmotnost 1,18), přidávaného po malých dávkách. Velké částice, které vyplavaly na povrch, se okamžitě odstraní a směs se nechá 45 minut. Během této doby vyplavou na povrch vajíčka helmintů, které mají nižší specifickou hmotnost než roztok chloridu sodného. Povrchový film se odstraní drátěnou smyčkou o průměru asi 1 cm a přenese se na podložní sklíčko ke zkoumání pod mikroskopem.
Kalantariánská metoda. Účinnost plovoucí metody se zvyšuje nahrazením chloridu sodného nasyceným roztokem dusičnanu sodného. V tomto případě se směs udržuje po dobu 10-15 minut.
Povrchový film vzniklý po usazení směsi fekálií roztokem chloridu sodného nebo dusičnanu sodného lze také odstranit podložním sklíčkem. Za tímto účelem se nádoba naplněná až po okraj směsí fekálií se solným roztokem přikryje sklíčkem tak, aby její spodní povrch byl v kontaktu s kapalinou. Po usazení se sklo vyjme a po rychlém otočení povrchu, na kterém se film nachází, se prohlédne pod mikroskopem.
Oškrábání spirálovitých záhybů (k identifikaci vajíček červů a onkosfér tasemnice skotu) se provádí ráno před provedením toalety. K seškrábnutí okolí řitního otvoru se používá dřevěná špachtle namočená ve vodě nebo 50% roztoku glycerinu. Výsledný materiál se přenese na podložní sklíčko v kapce vody nebo 50% roztoku glycerolu a prohlédne se pod mikroskopem. Špachtle lze nahradit navlhčeným vatovým tamponem, kterým perianální oblast otřete a poté dobře opláchněte ve vodě. Voda se odstředí a sraženina se zkoumá pod mikroskopem.
Bermannova metoda (pro detekci larev). Kovová síťka potažená 5-6 g fekálií je upevněna na skleněné nálevce vložené do stojanu. Na spodní konec trychtýře je nasazena pryžová hadička se svorkou. Nálevka je naplněna vodou ohřátou na t ° 50 °, takže spodní část sítě s výkaly přichází do kontaktu s vodou. Larvy se aktivně pohybují do vody a hromadí se ve spodní části pryžové trubice. Po 4 hodinách se kapalina spustí do centrifugačních zkumavek, odstředí se a sraženina se zkoumá pod mikroskopem.
Analýza sputa, nosního hlenu a vaginálního výtoku k detekci vajíček motolice paragonimus, ascaris a larev měchýře, vajíček červů, echinokokových fragmentů močového měchýře. Vyšetřovaná část hlenu (sekrece) se nanese na sklo a prohlédne se makroskopicky na černobílém pozadí a poté pod mikroskopem. K testovanému materiálu můžete přidat 25% roztok antiforminu, důkladně protřepat a držet po dobu 1-1,5 hodiny, aby se hlen rozpustil. Směs se odstředí a sraženina se zkoumá pod mikroskopem.
Analýza duodenální a žaludeční šťávy k detekci vajíček motolice jaterní, měchovce, larev Strongyloides. Všechny tři části obsahu duodena získané pomocí se odstředí a sediment se zkoumá pod mikroskopem. Také prozkoumat a.
Studium tkání. K identifikaci larev Trichinella se kousky bioptovaného svalu opatrně rozdělí na vlákna, vmáčknou se mezi skla kompresoru (silná skla se šrouby) a zkoumají se pod mikroskopem se stínovaným světlem. K identifikaci cysticerci se svaly stratifikují preparačními jehlami, izolovaný váček se očistí od okolní tkáně, vmáčkne mezi dvě sklíčka a vyšetřuje pod lupou.
Krevní test (k detekci larev filariae). Visící kapka se zkoumá na krycím sklíčku lemovaném vazelínou. Můžete smíchat 0,3 ml krve s 10násobným množstvím 3% roztoku. Směs se odstředí a sraženina se zkoumá pod mikroskopem. Pro obohacení přípravků se přidají 3 ml 2% roztoku formalínu nebo 5násobné množství tekutiny skládající se z 95 ml 5% roztoku formalínu, 5 ml kyseliny octové a 2 ml koncentrovaného alkoholového roztoku hematoxylinu. do 1 ml žilní krve. Směs se odstředí, sraženina se promyje destilovanou vodou a zkoumá se pod mikroskopem. Pro rozlišení různých typů filárií se vyšetřují nátěry obarvené podle Giemsa-Romanovského metody.
Metody imunologické diagnostiky. Aplikujte (aglutinace, fixace komplementu) a alergické diagnostické testy (viz) s odpovídajícím typem helmintů.
Helmintologické metody výzkumu. Rýže. Vejce helmintů. 1-10 - vajíčka škrkavek (háďátek): 1 - 3 - škrkavky (1 - oplozené vajíčko, 2 - oplozené vajíčko bez bílkovinné skořápky, 3 - neoplozené vajíčko); 4 - škrkavka kočičí; 5 - masožravci škrkavky; 5 - pinworms; 7 - šlehnutí bičem; 8 - tominx; 9 - měchovec; 10 - tricho-strongylid. 11-15 - vajíčka tasemnic (cestodes): 11 - tasemnice hovězí; 12 - tasemnice trpaslík; 13 - tasemnice krysí; 14 - tasemnice tykve; 15 - široká stuha. 16 - 24 - vajíčka motolic (trematoda): 16 - motolice (schistosomy) japonské; 17 - trematody (schistosomy) moč - sexuální; 18 - trematoda (schistosomy) Munson; 19 - trematoda (parogonymus) plicní; 20 - trematoda (opisthorchis) sibiřská (kočkovitá); 21 - trematoda (klonorchis) čínská; 22 - střevní trematoda (metagonimus); 23 - trematoda (fascioly) jater; 24 - trematodes (dicrocelium) kopinaté.
Stolice se vyšetřují dvěma způsoby:
1. Makroskopické - najít helminty, jejich hlavy, segmenty, zbytky strobili. Malé porce výkalů se smíchají s vodou v ploché lázni nebo Petriho misce a prohlížejí se v dobrém světle na tmavém pozadí, v případě potřeby pomocí lupy. Všechny podezřelé útvary se přenesou pinzetou do jiného šálku vody nebo na podložní sklíčko v kapce zředěného glycerinu.
S metodou podporující zkoumaná část fekálií se rozmíchá s vodou ve skleněném válci, po usazení se vrchní vrstva vody slije. Toto se několikrát opakuje. Když kapalina zprůhlední, vypustí se a sediment se prohlédne v Petriho misce.
2. Mikroskopické - k detekci vajíček a larev helmintů. Výzkumných metod je mnoho.
jeden). nativní stěr - nejběžnější a technicky dostupná metoda výzkumu. Můžete najít vajíčka a larvy všech helmintů. Při malém počtu vajíček se však ne vždy najdou. Proto se používá metoda obohacení.
jeden). Fülleborgova metoda - jedná se o metodu obohacování, založenou na vzcházení vajíček helmintóz v nasyceném roztoku NaCl (1,2 - hustota; 400 g NaCl na 1 litr vody; 40% roztok NaCl). Metoda je účinnější než nativní nátěr. 2-5 g fekálií se umístí do skleněných nádob a naplní se roztokem NaCl, zamíchá se a po 45 minutách se vytvořený film odstraní kovovou smyčkou, na podložní sklíčko se umístí kapka glycerinu. Prozkoumejte pod mikroskopem. Nevýhodou metody je opožděné vzcházení vajíček různých helmintů, tasemnice zakrslé - po 15-20 minutách, škrkavky - 1,5 hodiny, bičíkovce - 2-3 hodiny.
2) Kalantaryova metoda - také metoda obohacování, ale používá se nasycený roztok NaNO 3 (hustota 1,38). Většina vajíček plave, není potřeba žádné zkoumání sedimentu. Nevýhodou je, že vejce jsou dlouho uchovávána v roztoku, což vede k tomu, že některá vejce začnou bobtnat a usazovat se na dně, mizet z povrchového filmu.
3. Gorjačovova metoda - na principu ukládání vajíček, detekce vajíček motolice. Jako roztok se použije nasycený roztok NaCl a navrch se opatrně navrství 3-4 ml roztoku stolice. Po 15-20 hodinách se vajíčka motolice usadí na dně. Kapalina se vypustí, sedimentuje na podložním sklíčku a pod mikroskopem.
4. Shulmanova metoda kroucení – k detekci larev helmintů ve výkalech. Prohlížejte pouze čerstvě izolované výkaly. 2-3 g se umístí do skleněné nádoby a přidá se 5násobné množství vody, rychle se promíchá tyčinkou, aniž by se dotklo stěn nádoby - 20-30 minut, poté se tyčinka rychle vyjme a kapka kapalina na konci se přenese na podložní sklíčko a mikroskopuje se.
5. Bermanova metoda - vychází ze schopnosti larev helmintů migrovat za teplem a slouží k jejich identifikaci ve výkalech.
6. Metoda Harady a Moriho (způsob pěstování larev) a doporučuje se pro testování ankylostomiázy. Metoda je založena na tom, že v teple a na vlhkém filtrovaném papíru se z vajíček měchovky vyvinou filariformní larvy, které lze snadno detekovat. Na střed proužku filtrovaného papíru se nanese 15 g fekálií, papír s fekáliemi se vloží do sklenice tak, že spodní konec je ponořen do vody a horní konec se zafixuje korkem. Nádoba se udržuje v termostatu při 28 0 C po dobu 5-6 dnů. Filariformní larvy se během této doby vyvinou a sestoupí do vody. Kapalina se zkoumá pod lupou. Pokud je obtížné ji detekovat, kapalina se po usmrcení larev zahřátím na 60 0 odstředí. Laboratorní technik musí nosit rukavice.
7. Metody enterobiázy – identifikace vajíček červů a tasemnice skotu.
a) škrábání z perianálních záhybů - vatovým tamponem pevně navinutým na dřevěné tyči a navlhčeným 50% roztokem glycerinu. V laboratoři se tampon smyje 1-2 kapkami 50% vodného roztoku glycerolu.
b) metoda lepkavých roztočů (Grahamova metoda)
Lepicí páska se nanese na perianální záhyby, poté se lepivou vrstvou na podložní sklíčko a podrobí mikroskopování.
C) škrábání pomocí očních tyčinek (Rabinovichova metoda). K perianálnímu seškrabování se používají skleněné oční tyčinky, jejichž nejširší část je přelepena speciálním lepidlem, které umožňuje uchycení vajíček červů.
Vyšetření krve, žluči, sputa a svalů
Krevní mikroskopie – detekují se larvy filárií.
Vyšetření sputa - vajíčka paraganimu, larvy škrkavek, necator, strongyloid, prvky echinokokového měchýře.
Vyšetření svalů – při podezření na trichinelózu se vyšetřují svaly pacienta nebo mrtvoly a také maso, které údajně způsobilo infekci člověka. Pro účely trichinoskopie se sval nařeže na malé kousky a vloží do kompresorů, jedná se o dvě široká tlustá skla, která rozdrtí svaly a larvy Trichinella se nacházejí ve formě kapslí - metoda komprese.
Metoda trávení – svaly se polijí umělou žaludeční šťávou (roztok kyseliny chlorovodíkové a pepsin). Svaly jsou stráveny a larvy jsou snadno detekovány. Stanovení intenzity invaze: počet larev do 200 na 1 g svalové tkáně - mírná intenzita invaze; do 500 - intenzivní; přes 500 - superintenzivní invaze.
Sérologické metody
